脆性位點(diǎn)基因WWOX、FHIT的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)染色體脆性位點(diǎn)基因WWOX及FHIT在肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中的表達(dá)情況，并探討二者的表達(dá)與HCC臨床病理特征的關(guān)系及其意義。
　　 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)，檢測(cè)44例HCC、相應(yīng)癌旁肝組織、5例距常肝組織中WWOX mRNA轉(zhuǎn)錄剪接體的表達(dá)，同時(shí)采用Real-timePCR方法檢測(cè)HCC和癌旁肝組織中WWOX野生型mRNA的

2、表達(dá)情況，并分析WWOX mRNA的表達(dá)與各臨床病理學(xué)特征的關(guān)系；采用蛋白免疫印跡(WesternBlot)和免疫組織化學(xué)染色(IHC)方法在蛋白質(zhì)水平上分別檢測(cè)了32例HCC、相應(yīng)癌旁肝組織、5例正常肝組織中WWOX的表達(dá)和142例HCC、相應(yīng)癌旁肝組織、15例正常肝組織中FHIT和WWOX的表達(dá)情況以及二者表達(dá)的相關(guān)性，分析FHIT和WWOX蛋白表達(dá)與HCC的臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　

3、結(jié)果：
　　 1、應(yīng)用RT-PCR法在HCC中檢測(cè)到WWOX的異常轉(zhuǎn)錄剪接體Variant4，PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果證實(shí)為缺失6～8外顯子的剪接體。Variant4在HCC中的出現(xiàn)率為70.5％，明顯高于癌旁肝組織的38.6％和正常肝組織的40％(P＜0.01)，其表達(dá)在肝硬化和無(wú)肝硬化組中有差別(P＜0.05)。HCC中還檢測(cè)到WWOX的異常轉(zhuǎn)錄剪接體Variant6，測(cè)序結(jié)果證實(shí)為缺失6～9外顯子，第5外顯子與變異的6'外顯子拼

4、接形成的剪接體。Variant6在HCC中的出現(xiàn)率為72.7％，低于癌旁的81.8％和正常的80％(P＜0.05)。這兩型異常剪接體的出現(xiàn)與HCC的大小、組織學(xué)類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)、分化、血管侵犯、包膜破壞、衛(wèi)星病灶形成等病理特征及HCC患者的性別、AFP水平、復(fù)發(fā)情況均無(wú)關(guān)。
　　 2、Real-time PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HCC中并無(wú)WWOX野生型mRNA(Variantl)的表達(dá)缺失，但其表達(dá)較癌旁肝組織明顯降低(P＜0.01

5、)。隨著HCC組織學(xué)分級(jí)的升高和分化程度的降低，WWOX野生型mRNA的表達(dá)量逐步減少(P＜0.05)，術(shù)后復(fù)發(fā)組WWOX野生型mRNA的表達(dá)低于未復(fù)發(fā)組(P＜0.05)。但WWOX野生型mRNA的表達(dá)與Variant4、Variant6的出現(xiàn)、HCC患者的性別、年齡以及HCC大小、組織學(xué)類(lèi)型、血管侵犯、包膜破壞、衛(wèi)星病灶出現(xiàn)等無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　 3、免疫組化結(jié)果顯示HCC中FHIT和WWOX表達(dá)的缺失/下降率分別為6

6、8.3％和77.5％，明顯低于癌旁肝組織和正常肝組織(P＜0.01)，二者的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.01)。隨著HCC組織學(xué)分級(jí)的升高、分化程度的降低，F(xiàn)HIT和WWOX的表達(dá)逐步減弱(P＜0.05)，二者表達(dá)還同血管侵犯、包膜破壞、衛(wèi)星病灶出現(xiàn)、復(fù)發(fā)等腫瘤惡性表型及AFP水平、組織學(xué)類(lèi)型有關(guān)(P＜0.05)，但與HCC患者的性別、年齡、HBV感染及肝硬化無(wú)關(guān)(P＜0.05)。免疫印跡實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)了HCC中WWOX蛋白的平均表達(dá)水平明顯低于

7、癌旁肝組織(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在HCC中FHIT與WWOX的表達(dá)呈明顯正相關(guān)，二者的表達(dá)缺失/下降與腫瘤低分化、侵襲轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等提示不良預(yù)后的指標(biāo)有關(guān)。
　　 2、WWOX異常轉(zhuǎn)錄剪接體Variant4可能為致癌因素致癌作用的一個(gè)分子靶點(diǎn)。
　　 3、FHIT與WWOX在HCC中的改變或失活可能不是直接由HBV感染所致。
　　 4、FHIT與WWOX在HCC中同為腫瘤抑制基