扎里奴思方對大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障通透性的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　①通過檢測神經(jīng)功能評分、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)變化，觀察扎里奴思方對腦缺血再灌注損傷大鼠的腦保護(hù)及神經(jīng)功能恢復(fù)作用。
　?、谕ㄟ^檢測IgG（Immunoglobulin G）含量和AQP-4（Aquaporin-4）表達(dá)變化，動態(tài)觀察扎里奴思方對腦缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障通透性的影響。
　?、弁ㄟ^觀察扎里奴思方對ZO-1（Zonula occludens-1）、VCAM-1（Vascula

2、r cell adhesion molecule-1）和P-gp（P-glycoprotein）表達(dá)變化，探討其調(diào)控血腦屏障通透性可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　?、賁D雄性大鼠，月齡3個月，250只，體重(300±50)g，隨機(jī)分為假手術(shù)組A、模型組B、尼莫地平組C、扎里奴思方組D、聯(lián)合用藥組E（扎里奴思方+尼莫地平），其中后4組分別根據(jù)取材時(shí)間分為1、3、7、14d組，每組15只，假手術(shù)組10只大鼠。
　?、诰衷钚?/p>

3、腦缺血再灌注大鼠模型(MCAOR)是采用線栓阻塞大腦中動脈，2h后拔出線栓進(jìn)行再灌注；
　　③假手術(shù)和模型組用生理鹽水灌胃，藥物治療組分別用相應(yīng)的藥物灌胃。大鼠灌胃用藥量根據(jù)生藥材含量按等效劑量換算關(guān)系計(jì)算，灌胃體積為1ml·100g-1，扎里奴思方為1.50g·mL-1；尼莫地平1.08mg·mL-1。大鼠術(shù)后3小時(shí)開始用藥，每日用藥1次。
　?、懿捎肎arcia JH評分方法對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分；采用干濕重法測定腦缺血

4、再灌注損傷大鼠腦組織含水量變化；HE染色法觀察腦組織病理形態(tài)，透射電鏡下觀察大腦神經(jīng)元和微血管超微結(jié)構(gòu)變化；采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠腦缺血再灌注損傷后IgG、ZO-1、AQP-4、P-gp、VCAM-1的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化和神經(jīng)功能恢復(fù)
　?、倌X組織病理形態(tài)改變：假手術(shù)組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)元細(xì)胞豐富，細(xì)胞大小均勻一致；模型組大鼠腦組織損傷側(cè)可見神經(jīng)元細(xì)胞萎縮

5、，空泡樣變，排列疏松，腦組織水腫；各藥物組神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同程度改善，尤以扎里奴思方和聯(lián)合用藥14d組恢復(fù)的尤為顯著。
　　②腦組織超微結(jié)構(gòu)改變：假手術(shù)組神經(jīng)元細(xì)胞核膜完整、核仁清晰、染色質(zhì)均勻、細(xì)胞器豐富；模型組神經(jīng)元細(xì)胞損傷明顯；與模型組相比，各藥物組神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有不同程度改善，以扎里奴思方和聯(lián)合用藥組作用尤為明顯。
　　③大鼠腦組織含水量變化：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織損傷側(cè)含水量明顯增高,3d達(dá)到峰值，7、

6、14d有所下降（P＜0.01，P＜0.05)；與模型組比較，藥物組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織損傷側(cè)含水量均降低（P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、14d組和聯(lián)合用藥各組大鼠腦含水量降低（P＜0.05）。
　　④大鼠神經(jīng)功能評分變化：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的神經(jīng)功能評分較假手術(shù)組均降低明顯（P＜0.01)；與模型組比較，藥物組大鼠各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評分均顯著增高（P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方14

7、d組和聯(lián)合用藥7、14d組神經(jīng)功能評分增高（P＜0.05，P＜0.01)。與3d組比較，聯(lián)合用藥7、14d組和扎里奴思方14d組神經(jīng)功能評分均增高（P＜0.01，P＜0.05)。
　　2.大鼠腦缺血再灌注損傷后血腦屏障通透性變化的相關(guān)指標(biāo)
　?、俅笫竽X組織中IgG含量變化：與假手術(shù)組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中IgG含量1d即開始升高，3d達(dá)到峰值，7、14d有所下降，但仍高于假手術(shù)組。(P＜0.01)；與模型組比較，藥

8、物組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中IgG含量降低(P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、14d組和聯(lián)合用藥組各時(shí)間點(diǎn)IgG含量均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1、3d組IgG含量降低(P＜0.05)。
　　②大鼠腦組織中AQP-4表達(dá)變化：與假手術(shù)組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中AQP-4的表達(dá)均顯著增高（P＜0.01)，1d即開始升高，3d達(dá)到峰值，7、14d有所下降；與模型

9、組比較，藥物組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中AQP-4的表達(dá)均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方14d和聯(lián)合用藥7、14d組AQP-4的表達(dá)降低（P＜0.01，P＜0.05)。
　　3.扎方調(diào)控大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障通透性的機(jī)制
　?、俅笫竽X組織VCAM-1表達(dá)變化：與假手術(shù)組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)VCAM-1表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；與模型組比較，各藥物組1、3、7d組VCAM-1表達(dá)顯著

10、降低(P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方組和聯(lián)合用藥組VCAM-1表達(dá)有降低趨勢，但無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　?、诖笫竽X組織ZO-1表達(dá)變化：與假手術(shù)組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)ZO-1表達(dá)均顯著降低(P＜0.01)；與模型組比較，藥物組各時(shí)間點(diǎn)ZO-1表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方組和聯(lián)合用藥組ZO-1表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1、3d組ZO-1表達(dá)顯著增加(P＜

11、0.01)。
　?、鄞笫竽X組織P-gp表達(dá)變化：與假手術(shù)組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)P-gp表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；與模型組比較，尼莫地平7、14d組、扎里奴思方3、7、14d和聯(lián)合用藥3、7、14d組P-gp表達(dá)明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、7、14d組和聯(lián)合用藥3、7、14d組P-gp表達(dá)明顯降低(P＜0.05)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1d組P-gp表達(dá)明顯降低(P＜0.05)

12、。
　　結(jié)論：
　　1.扎里奴思方對大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，減輕腦水腫，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，且隨著用藥時(shí)間的延長，其腦保護(hù)作用呈逐漸增強(qiáng)趨勢。
　　2.大鼠腦缺血再灌注損傷后血腦屏障通透性呈現(xiàn)先增強(qiáng)后降低變化，3d達(dá)到峰值，扎里奴思方降低血腦屏障通透性的作用顯著，且隨著時(shí)間的延長，其作用逐步增強(qiáng)。聯(lián)合用藥在腦缺血再灌注損失早期降低血腦屏障通透性的作用更為明顯。
　　3.扎里奴思方降低血腦屏障通