腦缺血再灌注損傷對(duì)羥基紅花黃色素A透過血腦屏障的研究.pdf

1、目的：缺血性腦血管疾病是一類常見的嚴(yán)重危害人類健康的疾病，溶栓及腦保護(hù)治療仍然是治療缺血性腦血管疾病的兩大主要治療手段，而中藥及其有效成分在缺血性腦血管病治療中的作用正逐漸受到重視。紅花為傳統(tǒng)活血化瘀中藥，臨床主要用于治療缺血性心腦血管疾病。紅花活血化瘀的主要成分為水溶性的紅花黃色素。紅花黃色素中含量較高且具有活性的成分為羥基紅花黃色素A（hydroxysaffloryellow A，HSYA），文獻(xiàn)報(bào)道，HSYA具有抗血小板聚集和抑制

2、血栓形成、抗氧化應(yīng)激、改善缺血狀態(tài)下腦細(xì)胞的能量代謝，以及減輕谷氨酸和NaCN誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷等作用。 血腦屏障（blood—brain barrier，BBB）是血液與腦實(shí)質(zhì)之間對(duì)物質(zhì)有選擇性通透且通透性較低的動(dòng)態(tài)界面，由腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（brain capillary endothelial cells，BCECs）及其緊密連接、基膜、周細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞足突組成，BCECs缺乏收縮蛋白，無(wú)窗孔，細(xì)胞吞飲泡較少，含有豐富的酶系

3、統(tǒng)，此結(jié)構(gòu)決定了大分子、親水性藥物很難進(jìn)入中樞神經(jīng)組織，保證中樞神經(jīng)組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。BBB的通透性并非一成不變，腦缺血再灌注損傷時(shí)，自由基和一氧化氮生成增多，基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥因子和黏附分子表達(dá)增多，緊密連接蛋白表達(dá)減少，白細(xì)胞聚集、浸潤(rùn)等，破壞BCECs及基膜，導(dǎo)致BBB通透性增加。 治療腦缺血的藥物必須透過BBB，并在腦組織達(dá)到有效濃度才能發(fā)揮治療作用。研究表明，HSYA具有抗腦缺血作用，并且HSYA已經(jīng)被批準(zhǔn)進(jìn)行缺血性

4、腦血管疾病治療的臨床試驗(yàn)，但是HSYA能否透過BBB以及HSYA在腦缺血狀態(tài)下透過BBB的量是否發(fā)生改變，未見文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究腦缺血再灌注損傷對(duì)HSYA透過BBB的影響，并探討其影響機(jī)制。 方法：大腦中動(dòng)脈栓線法制備腦缺血2h再灌注3h或24 h損傷模型。以腦組織勻漿中伊文思藍(lán)（EB）含量定量評(píng)價(jià)BBB通透性改變；反相高效液相色譜法測(cè)定血漿和腦組織勻漿中HSYA含量，考馬斯亮蘭法測(cè)定腦組織勻漿中蛋白含量。腦組織HSYA濃度以

5、腦組織HSYA含量/蛋白含量（μg/g）來表示；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)腦組織勻漿中基質(zhì)金屬蛋白酶—9（MMP—9）的表達(dá)。 結(jié)果：（1）假手術(shù)組大鼠腦組織EB的含量較低。與假手術(shù)組比較，缺血再灌注3h組腦組織EB的含量明顯增加，BBB開放；缺血再灌注24 h組腦組織EB的含量顯著增加，BBB進(jìn)一步開放。（2）注射HSYA10 min后，對(duì)照組腦中可檢測(cè)到HSYA，90 min時(shí)降至檢測(cè)線下。與對(duì)照組比較，假手術(shù)3h、24 h組腦組織HS

6、YA的濃度未見明顯升高；缺血再灌注3h、24 h組缺血側(cè)腦組織HSYA的濃度顯著增加，未缺血側(cè)腦組織HSYA的濃度無(wú)明顯變化。（3）假手術(shù)組和假手術(shù)給藥組腦組織未檢測(cè)到MMP—9的表達(dá)，與假手術(shù)組比較，缺血再灌注3h、24 h組腦組織MMP—9的表達(dá)顯著增加；與假手術(shù)給藥組比較，缺血再灌注3h、24 h給藥組腦組織MMP—9的表達(dá)顯著增加；缺血再灌注組與缺血再灌注給藥組腦組織MMP—9的表達(dá)未見明顯不同。 結(jié)論：HSYA可以透過