羥基紅花黃色素A和乳香酸對腦缺血再灌注損傷神經(jīng)與血瘀證血管的保護作用及機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　在公元1665年（清康熙年間）的《外科大成》中，記載的方劑“活血定痛湯”就是以紅花-乳香作為藥對（各三錢），治血出作痛，紅花長于活血化瘀，消散癥瘕；乳香有活血行氣止痛，消腫生肌之功效，兩藥“相須”“相使”。前期課題組研究顯示乳香的藥效物質(zhì)11-羰基-β-乳香酸(11-keto-β-boswellic acid, KBA)能改善腦缺血再灌注損傷( cerebral ischemia reperfusion inju

2、ry, CIRI)，β-乳香酸(β-boswellic acid,β-BA)能改善大鼠血瘀證。紅花活血化瘀作用的主要藥效成分羥基紅花黃色素 A(hydroxy saffloryellow A, HSYA)，在臨床上用于治療血液循環(huán)障礙性疾病，也有改善腦缺血再灌注損傷作用，但兩藥聯(lián)合使用的作用很少研究。因此，本課題擬從兩方面研究紅花-乳香的的協(xié)同作用，一方面研究 HSYA聯(lián)合 KBA保護腦缺血再灌注損傷引起的神經(jīng)損傷作用機制，另一方面研究

3、 HSYA聯(lián)合β-BA對血瘀證引起的血管內(nèi)皮損傷的改善作用及機制。以揭示HSYA-KBA和HSYA-β-BA的配伍機制。
　　第一部分 HSYA和KBA改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷
　　目的：
　　1．探討HSYA和KBA對藥配伍是否能改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷及協(xié)同作用機制。
　　2．明確 HSYA和 KBA對藥配伍是否有協(xié)同減少體外氧糖剝奪 PC12細胞的氧化應激作用。
　　方法：
　　體內(nèi)

4、研究中，我們選擇了線栓法來建立大鼠腦缺血再灌注模型，以進行缺血性腦梗死大鼠的相關研究。觀察給予HSYA和KBA后大鼠腦梗死面積的改變。體外研究選用了氧糖剝奪（OGD）誘導 PC12細胞損傷模型，檢測丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的等抗氧化指標含量變化。
　　結果：
　　1. HSYA(100 mg/kg)和KBA(25 mg/kg)均分別能改善腦缺血再灌注損傷大鼠的腦梗死面積和神經(jīng)行為學評分，且合用組HSYA(5

5、0 mg/kg)+KBA(12.5 mg/kg)改善效果更好(P＜0.05)。
　　2. MTT檢測結果顯示 HSYA(10μM)、KBA(50μM)、合用組 HSYA(5μM)、KBA(25μM)對 OGD誘導損傷的 PC12細胞均有抗凋亡作用(P＜0.05)，且合用組HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更強(P＜0.05)。
　　3. HSYA(10μM)、KBA(50μM)和合用組HSYA(5μM)、KBA(25

6、μM)對OGD誘導的PC12細胞有抗氧化應激損傷作用。HSYA(10μM)和KBA(50μM)能改善PC12細胞中氧化還原標志物 SOD活力和 MDA水平(P＜0.05)，且合用組 HSYA(5μM)和KBA(25μM)作用更強(P＜0.05)。
　　結論：
　　證實了 HSYA和 KBA對藥配伍在改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷方面有協(xié)同增效的作用，且對OGD誘導的PC12細胞有協(xié)同抗凋亡和協(xié)同抗氧化應激損傷作用。
　

7、　第二部分 HSYA和β-BA改善血瘀證誘導的血管損傷
　　目的：
　　1.研究HSYA和β-乳香酸(β-BA)配伍是否能改善血瘀證所致的大鼠血液流變學異常、保護血管內(nèi)皮功能，兩者改善作用是否有協(xié)同性。
　　2.探討HSYA和β-BA對OGD損傷的HUVEC細胞的保護作用以及對其NO生成的影響，探討其保護作用是否呈現(xiàn)協(xié)同性。
　　方法：
　　體內(nèi)研究采用血瘀證大鼠模型，給予 HSYA和β-BA后，檢測全血粘

8、度和凝血功能，以及血漿中ET-1和NO濃度，觀察其對大鼠血液流變學的影響以及血管內(nèi)皮功能的變化，并取頸動脈觀察病理變化。體外研究采用OGD損傷的HUVEC細胞，給予HSYA和β-BA后檢測其對細胞活性和細胞生成NO功能的影響。
　　結果：
　　1.對比空白對照組，血瘀證模型組的各項血流變學指標有明顯變化，全血粘度顯著升高，活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)明顯縮短，纖維蛋白原(FIB)

9、含量增加，血漿ET-1水平升高，血漿NO含量降低。對比模型組，HSYA(100 mg/kg)組、β-BA(100 mg/kg)、合用組HSYA(50 mg/kg)+β-BA(50 mg/kg)全血粘度明顯降低，TT、APTT、PT顯著延長(P＜0.05)，纖維蛋白原含量減少(P＜0.05)，血漿ET-1水平降低，血漿NO水平升高(P＜0.05)。且合用組HSYA(50 mg/kg)+β-BA(50 mg/kg)變化更顯著(P＜0.05)

10、。
　　2. MTT檢測結果顯示HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用組HSYA(5μM)+β-BA(25μM)對OGD誘導損傷的HUVEC有抗凋亡作用，且合用組HSYA(5μM)和β-BA(25μM)作用更強(P＜0.05)。
　　3．與OGD組相比HSYA(10μM)、β-BA(50μM)、合用組HSYA(5μM)+β-BA(25μM)能增加HUVEC細胞NO的生成(P＜0.05)，且合用組HSYA(5μM)和