ERα抑制Myocardin誘導(dǎo)的子宮平滑肌細(xì)胞分化.pdf

1、目的:
　　1.研究Myocardin誘導(dǎo)的子宮平滑肌細(xì)胞分化標(biāo)志基因的表達(dá)；
　　2.研究 ERα促進(jìn)子宮平滑肌細(xì)胞的增值作用；
　　3.研究 ERα所抑制的 myocardin誘導(dǎo)的子宮平滑肌細(xì)胞分化標(biāo)志基因的轉(zhuǎn)錄激活和表達(dá)；
　　4.研究ERα和myocardin之間的蛋白蛋白相互作用。
　　方法:
　　1.建立SD大鼠子宮肌瘤模型。
　　2. SD大鼠子宮肌瘤模型建立后分別取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照

2、組子宮平滑肌組織,利用免疫組織化學(xué)、RT-PCR、western bloting實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)Myocardin、平滑肌分化標(biāo)志基因SM22α、ERα、平滑肌增值標(biāo)志基因PCNA在SD大鼠正常子宮平滑肌和子宮肌瘤組織的表達(dá)。
　　3.原代細(xì)胞培養(yǎng)(SD大鼠原代子宮肌瘤細(xì)胞、正常子宮平滑肌細(xì)胞),檢測(cè)SM22-LUC、SM22 mut-LUC、SM22 Emut-LUC的熒光素酶活性和子宮平滑肌細(xì)胞分化與增殖marker的表達(dá)。

3、>　　4.在COS-7細(xì)胞培養(yǎng)中,Co-IP檢測(cè)myocardin和ERα之間的蛋白蛋白相互作用。
　　結(jié)果:
　　1.肉眼觀察和HE染色驗(yàn)證了SD大鼠子宮肌瘤模型。
　　2. RT-PCR、免疫組化、western bloting檢測(cè)結(jié)果,SM22α和Myocardin的表達(dá)正常子宮平滑肌組織中比子宮肌瘤組織中的表達(dá)量高。可是 PCNA、ERα的表達(dá)在子宮肌瘤組織中比正常子宮平滑肌組織中含量高。
　　3.原代細(xì)

4、胞中LUC結(jié)果顯示myocardin驅(qū)動(dòng)SM22 Luciferease的活性,而ERα抑制myocardin驅(qū)動(dòng)的SM22 Luciferease的轉(zhuǎn)錄活性。
　　4. Co-IP證實(shí)ERα和myocardin之間蛋白蛋白形成復(fù)合物。
　　結(jié)論:
　　1. Myocardin通過(guò)與CArG-box結(jié)合激活下游分化基因SM22α的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。
　　2. ERα抑制myocardin對(duì)SM22α的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),進(jìn)