安顫靈含藥血清對(duì)PC12細(xì)胞泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的影響.pdf

1、研究背景帕金森病(Parkinson disease，PD)是一種常見于中老年人的第二大神經(jīng)退行性疾病，為老年人兩大慢性殺手之一。隨著老齡化社會(huì)的來臨，PD患病率正在世界范圍內(nèi)逐年增高，據(jù)世界帕金森病協(xié)會(huì)資料顯示，全球現(xiàn)有超過400萬帕金森病患者。我國目前約有帕金森病患者172萬，居全球第一，而且每年還要新增約10萬患者。因此帕金森病已經(jīng)成為我國乃至世界各國面臨的重大醫(yī)學(xué)和社會(huì)問題。 研究表明：中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性缺失伴胞

2、漿內(nèi)Lewy小體的形成是帕金森病的主要病理改變，而Lewy小體內(nèi)主要聚集有a-突觸核蛋白(a-synuclein)、泛素(ubiquitin)等蛋白。越來越多的證據(jù)顯示Lewy小體的形成與泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system，UPS)功能缺損密切相關(guān)。目前，在治療上，人們普遍采用以左旋多巴為主的替代療法，雖然在緩解PD患者癥狀上有一定療效，但同時(shí)也會(huì)出現(xiàn)一些嚴(yán)重的毒副作用，且不能有效阻止病情的發(fā)展。近

3、年來的研究證實(shí)：中藥治療PD療效確切，在延緩疾病的進(jìn)程，減輕西藥治療后的不良反應(yīng)，控制PD的一些非運(yùn)動(dòng)障礙癥狀等方面發(fā)揮了重要作用。但目前對(duì)中藥治療PD的機(jī)理探討上，國內(nèi)還多局限于從氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、興奮性氨基酸毒性、免疫反應(yīng)等方面入手，未見對(duì)本病關(guān)鍵性病理環(huán)節(jié)UPS的研究。 本課題所采用的中藥復(fù)方安顫靈為導(dǎo)師吳正治教授在承擔(dān)國家十五科技攻關(guān)項(xiàng)目“帕金森病中西醫(yī)結(jié)合綜合治療優(yōu)化方案研究”工作期間，以古今文獻(xiàn)相關(guān)方藥的系統(tǒng)整體為

4、基礎(chǔ)，結(jié)合多年科研和臨床經(jīng)驗(yàn)，并根據(jù)其提出的本病新的中醫(yī)病機(jī)假說——“脾濕困阻、氣機(jī)不暢、肌肉失主”，以理脾化濕為主，輔以行氣活血、柔肝止痙立法組方，經(jīng)反復(fù)篩選優(yōu)化而成的純天然中藥復(fù)方。經(jīng)過多年臨床應(yīng)用，對(duì)早中期帕金森病療效顯著，對(duì)晚期和多巴胺制劑失敏的帕金森病患者也有一定療效。 研究目的：本課題采用lactacystin制作泛素一蛋白酶體系統(tǒng)損傷的細(xì)胞模型，研究泛素一蛋白酶體系統(tǒng)功能損傷后細(xì)胞凋亡，a-synuclein、ub

5、iquitin、及TH表達(dá)的變化，并利用Tunel、免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察安顫靈含藥血清在抗凋亡及改善UPS功能等方面的作用機(jī)制，旨在為中藥安顫靈治療PD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為PD治療提供新的思路。 研究方法按照血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法制備安顫靈含藥血清，采用lactacystin作用于Pcl2細(xì)胞，建立泛素一蛋白酶體系統(tǒng)損傷的細(xì)胞模型。將含藥血清分為大、中、小劑量組，MTT方法檢測(cè)各組的細(xì)胞活力；將對(duì)數(shù)生長期的PC12細(xì)胞分為正常組、lac

6、tacystin組(損傷組)、中藥組，通過Tune1及免疫細(xì)胞化學(xué)方法，觀察各組細(xì)胞凋亡，及a-synuclein、ubiquitin、TH表達(dá)的情況。 研究結(jié)果：與大、小劑量組相比，中劑量組細(xì)胞的存活率顯著升高(P<0.01)；與正常組相比，lactacystin組細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯增加(P<0.01)，a-synuclein、ubiquitin陽性細(xì)胞數(shù)亦均增多，而TH陽性細(xì)胞明顯減少；與lactacystin組相比，中藥組細(xì)

7、胞凋亡指數(shù)明顯降低，a-synuclein、ubiquitin陽性細(xì)胞數(shù)均減少，TH陽性細(xì)胞明顯增加(P<0.01)。 研究結(jié)論：lactacystin可抑制Pc12細(xì)胞泛素蛋白酶體系統(tǒng)的功能，引起細(xì)胞內(nèi)a-synuclein、ubiquitin聚集增多及TH陽性細(xì)胞數(shù)減少；并可上調(diào)PC12細(xì)胞的凋亡水平，而安顫靈含藥血清的作用機(jī)制可能在于：其能改善細(xì)胞UPS的功能、降低細(xì)胞內(nèi)a-synuclein的聚集、抑制TH表達(dá)的減少和細(xì)