胰島素在大鼠脊髓損傷治療中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察胰島素對(duì)大鼠急性脊髓損傷是否具有治療作用及其可能的作用機(jī)理。 方法：60只健康的8～10周SD大鼠，體重200～250克，雌雄不限，隨機(jī)分為A組(損傷對(duì)照組)和B組(胰島素組)，每組各30只大鼠，根據(jù)改良Allen法，將T8-10椎板全部咬除，暴露硬脊膜，在硬脊膜表面放置-4×3.0mm大小的曲度與脊髓表面弧度相似的銅制墊片，用5g重物在玻璃試管的引導(dǎo)下從8cm高處垂直自由落下，打擊墊片，形成致傷力為40gcf，建立中

2、等脊髓損傷模型，B組給與11u/kg的胰島素，一日三次腹腔灌注，連續(xù)七天，A組給與等量同次數(shù)的生理鹽水腹腔灌注，在傷后8h、第3天、第7天、第14天、第28天，用4％多聚甲醛灌注固定傷段的脊髓，常規(guī)石蠟包埋切片，用Tunel法觀察脊髓的細(xì)胞凋亡情況，從而了解脊髓的繼發(fā)損傷的變化，在第1天、第3天、第7天、第14天、第28天采用Nissl染色觀察尼氏體和神經(jīng)元數(shù)量的變化，應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)脊髓的GAP-43陽(yáng)性表達(dá)的情況，以了解脊髓神經(jīng)

3、的恢復(fù)和生長(zhǎng)情況，在動(dòng)物行為恢復(fù)評(píng)價(jià)方面，我們采用BBB評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)。 結(jié)果：B組脊髓神經(jīng)的尼氏體在脊髓損傷后的崩解及恢復(fù)均好于A組，神經(jīng)元數(shù)量在多個(gè)時(shí)相點(diǎn)也要好于A組(P＜0.05或P＜0.01)，胰島素能促進(jìn)脊髓在脊髓損傷后的GAP-43陽(yáng)性表達(dá)，在脊髓損傷后第一天，GAP-43陽(yáng)性細(xì)胞就開(kāi)始出現(xiàn)，損傷后第七天陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)到高峰，以后逐漸下降，而尤其是對(duì)照組下降迅速，在第3天，第7天，第14天這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，胰島素組較損傷對(duì)

4、照組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多且著色深，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。脊髓損傷后8h凋亡細(xì)胞即出現(xiàn)，在在第7天時(shí)，陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)達(dá)高峰，以后逐漸下降，在第28天時(shí)，凋亡的陽(yáng)性細(xì)胞已很少有表達(dá)，但在8h、3天、7天、14天時(shí)， B組的凋亡細(xì)胞明顯少于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。在動(dòng)物后肢行為恢復(fù)方面，損傷后大鼠的后肢功能在A組及B組均逐漸有恢復(fù)，在第3天時(shí)，兩組BBB得分有差異，B組(胰島素組)得分大于損傷對(duì)照