2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、中山大學博士學位論文POAG的線粒體發(fā)病機理研究姓名:何媛申請學位級別:博士專業(yè):眼科學指導教師:葛堅20090525中山大學博士學位論文POAG的線粒體發(fā)病機理研究本研究以原代POAG患者小梁網細胞(GTM)為研究對象,原代正常人小梁網細胞(NTM)為對照,采用激光共聚焦顯微鏡、流式細胞技術觀察細胞內ROS水平,隨后分別經過線粒體呼吸鏈復合物I、II、III抑制劑魚藤酮(Rotenone,ROT)、TTFA、AM、MYX,抗氧化劑Vi

2、tE、NAC處理后檢測細胞內ROS的改變以及不同濃度ROT對小梁網細胞ROS產生的影響;采用流式細胞技術、MTT檢測ROT對小梁網細胞的生長抑制作用及其對細胞生長周期的影響;應用生物化學發(fā)光技術檢測細胞內ATP產量;紫外分光光度計檢測線粒體呼吸鏈復合物活性;活細胞及激光共聚焦顯微鏡下觀察各加藥組細胞的形態(tài);通過AnnexinVFITC/PI雙標記及流式細胞技術檢測細胞的凋亡率;LDH試劑盒檢測細胞損傷;用JC1標記細胞線粒體膜電位(△l

3、壬,m),并分別通過流式細胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡檢測ROT以及線粒體通透性轉換孑L(MPTP)抑制劑CsAArA對小梁網細胞△甲m影響的差異。使用流式細胞技術檢測了CytC的釋放,進一步證實了ROT誘導GTM細胞凋亡的線粒體通路。為進一步觀察GTM細胞MPTP開放的機制,采用ROT誘導,激光共聚焦顯微鏡以及流式細胞儀觀察ROT對細胞內鈣離子分布的影響,觀察鈣離子在GTM細胞MPTP開放中的作用,分析研究了通過ROT誘導GTM細胞MP

4、TP開放、CytC釋放和鈣離子誘導的線粒體鈣釋放(mCICR)之間的關系;為了進一步研究ROT誘導GTM內升高的鈣離子足來源于細胞外還是細胞內,應用流式細胞儀觀察IP3R抑制劑2APB和XeC、L型鈣通道抑制劑nifedipine處理后細胞內鈣信號的變化。實驗結果一、POAG患者小梁網細胞線粒體ComlexI活性下降引起ROS產生增多1小梁網細胞鑒定:原代正常人和POAG患者小梁網細胞均表達FN、LN、NSE、vimentin;第VII

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