Eotaxin在皮膚過(guò)敏性疾病中的表達(dá)調(diào)控及苦參方提取物與eotaxin siRNA的經(jīng)皮治療研究.pdf

1、皮膚過(guò)敏性疾病是高發(fā)的變態(tài)反應(yīng)型疾病，是當(dāng)皮膚暴露于外界過(guò)敏原時(shí)，由全身免疫系統(tǒng)參與而癥狀產(chǎn)生于局部的病理過(guò)程。除了在普通人群中常見(jiàn)外，對(duì)于在邊防、海島等惡劣環(huán)境下進(jìn)行工作與生活的部隊(duì)官兵，特別如遇戰(zhàn)事、災(zāi)害等嚴(yán)峻情況，影響尤為嚴(yán)重。因此，深入探討皮膚變態(tài)反應(yīng)性疾病的病理過(guò)程與機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點(diǎn)和新的治療藥物，具有重要的科學(xué)價(jià)值與軍事意義。
　　 變態(tài)反應(yīng)型疾病發(fā)病的確切機(jī)制目前仍不十分清楚，但炎癥細(xì)胞的募集是最終導(dǎo)致過(guò)

2、敏性炎癥發(fā)生和發(fā)展原因。嗜酸粒細(xì)胞(eosinophils，Eos)是過(guò)敏性疾病中重要的效應(yīng)細(xì)胞，其浸潤(rùn)于過(guò)敏部位，釋放毒性蛋白，造成組織損傷，導(dǎo)致炎癥發(fā)生。造成Eos局部浸潤(rùn)的最重要的趨化因子是嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(eotaxin/CCL11)，因此eotaxin的表達(dá)與調(diào)控是過(guò)敏性疾病的重要環(huán)節(jié)和藥物治療靶點(diǎn)。
　　 Eotaxin參與了皮膚過(guò)敏性疾病(如特異性皮炎、接觸性皮炎、藥物過(guò)敏性皮膚疾病等)的進(jìn)程已得到證實(shí)。而人體皮

3、膚由表皮、真皮和皮下組織構(gòu)成，eotaxin在過(guò)敏皮膚中的確切表達(dá)部位及表達(dá)的動(dòng)態(tài)過(guò)程目前還沒(méi)有證實(shí)。本研究中，我們以小鼠接觸性皮炎(ACD)模型為基礎(chǔ)，探討了eotaxin在過(guò)敏環(huán)境下皮膚中的表達(dá)部位及動(dòng)態(tài)特征。同時(shí)對(duì)皮膚過(guò)敏反應(yīng)的免疫學(xué)特征進(jìn)行了觀察，我們對(duì)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)的程度和時(shí)程進(jìn)行了比較。此外，為了闡明eotaxin表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，我們以構(gòu)成表皮層的角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)株HaCaT細(xì)胞和構(gòu)成真皮層的真皮成纖

4、維細(xì)胞(FBs)為基礎(chǔ)，使用TNF-α和IL-4刺激兩種細(xì)胞，觀察eotaxin分泌量的改變，并檢測(cè)與兩種因子相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和STAT6的激活情況，探討eotaxin表達(dá)的轉(zhuǎn)錄機(jī)制。
　　 皮膚過(guò)敏性疾病的治療是本課題關(guān)注的重要內(nèi)容。相對(duì)于化學(xué)藥物治療，傳統(tǒng)藥物更顯示出開(kāi)發(fā)成本低、療效好、副作用少、重視免疫平衡等優(yōu)點(diǎn)?？鄥⒎綖橐恢委熯^(guò)敏性皮膚病的傳統(tǒng)中醫(yī)藥方劑，其提取物的主要成份為苦參堿(Mat)、氧化苦參堿(Omt)

5、、槐果堿(Sop)、氧化槐果堿(Osp)以及荊芥揮發(fā)油(SVO)。我們考察了苦參方提取物(KS)凝膠劑對(duì)小鼠接觸性皮炎的治療效果，同時(shí)檢測(cè)其對(duì)eotaxin的抑制作用，并于細(xì)胞水平對(duì)其提取物抑制TNF-α和IL-4誘導(dǎo)的eotaxin表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步闡述。
　　 基因治療是目前疾病治療的一個(gè)研究熱點(diǎn)，我們嘗試性地對(duì)皮膚過(guò)敏性疾病的經(jīng)皮基因治療進(jìn)行了探索。微乳是經(jīng)皮給藥的一個(gè)良好劑型，將經(jīng)穩(wěn)定性修飾的eotaxin特異

6、性siRNA制成W/O型微乳劑型，經(jīng)皮給藥，觀察其對(duì)小鼠接觸性皮炎治療效果及對(duì)eotaxin的在皮膚組織中表達(dá)的抑制作用。
　　 第一部分：Eotaxin在皮膚過(guò)敏性疾病中的表達(dá)調(diào)控
　　 (一)Eotaxin在小鼠接觸性皮炎(ACD)中的表達(dá)規(guī)律研究。
　　 (二)Eotaxin在皮膚細(xì)胞中產(chǎn)生的調(diào)控機(jī)制研究。
　　 第二部分：苦參方提取物小鼠接觸性皮炎的治療作用及對(duì)eotaxin抑制作用研究
　

7、　 (一)苦參方提取物(KS)治療小鼠ACD的療效及機(jī)制研究。
　　 (二)KS抑制皮膚細(xì)胞中eotaxin表達(dá)機(jī)制研究。
　　 第三部分：Eotaxin特異siRNA微乳治療小鼠接觸性皮炎初步研究
　　 通過(guò)本課題的研究，進(jìn)一步證實(shí)了eotaxin在過(guò)敏性皮膚疾病病理過(guò)程中的重要意義，揭示了eotaxin在過(guò)敏性皮膚疾病中的表達(dá)規(guī)律及調(diào)控機(jī)制。證明了中藥方劑苦參方治療過(guò)敏性皮膚疾病的治療效果和作用機(jī)制。初步探