海洋生物活性物質(zhì)SBH-Ⅰ的神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng)作用.pdf

1、神經(jīng)退行性疾病是一類嚴(yán)重影響人類健康的常見病，這類疾病的共同點(diǎn)是都出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞退行性病變。近年來提出了神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)(neuroprotection)與神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng)(neurogenesis-enhancing)的概念，用具有神經(jīng)元保護(hù)及神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng)作用的活性物質(zhì)治療急性和慢性神經(jīng)元退行性疾病是一個(gè)新的課題。開發(fā)具有神經(jīng)活性的天然活性物質(zhì)更是近年來研究的熱點(diǎn)，而海洋生物已成為新天然產(chǎn)物的主要來源。如今，已經(jīng)從具有藥理活性的1000多種海洋

2、生物中分離出3000多種有醫(yī)用價(jià)值的活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)包括多肽類、糖類、萜類、生物堿類、大環(huán)內(nèi)酯類和聚醚類等化合物。所以，從海洋生物活性物質(zhì)中尋找具有神經(jīng)元保護(hù)及神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng)作用的海洋生物活性物質(zhì)是一個(gè)令人感興趣的課題。 SBH-I是本實(shí)驗(yàn)室從海洋生物.網(wǎng)球藻提取的活性物質(zhì)。SBH-I經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室前期的實(shí)驗(yàn)證實(shí)其能夠修復(fù)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性小鼠的腦損傷。 目的： 本課題用大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞PC12細(xì)胞作為

3、模型，檢測(cè)SBH-I是否對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有一定保護(hù)作用、是否具有神經(jīng)發(fā)生增強(qiáng)作用，以及觀察經(jīng)過SBH-I誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞通過側(cè)腦室移植對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)興奮毒性小鼠腦損傷模型的影響。 方法： 1選用神經(jīng)細(xì)胞的模式細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，建立過氧化氫和地塞米松誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型。利用MTT法檢測(cè)SBH-I對(duì)損傷細(xì)胞的細(xì)胞活力的影響；AO/EB熒光染色法觀察細(xì)胞形態(tài)變化檢測(cè)SBH-I對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響。

4、 2用不同濃度的SBH-I作用PC12細(xì)胞，MTT法檢測(cè)SBH-1作用24h對(duì)細(xì)胞增殖的影響，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)6h、24h、48h、72h、5d、及7dPC12細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)化法檢測(cè)培養(yǎng)到第七天時(shí)神經(jīng)元特異蛋白.神經(jīng)絲蛋白(NF-1)表達(dá)的情況。 3以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用谷氨酸鈉灌胃法建立神經(jīng)毒性損傷的動(dòng)物模型，通過側(cè)腦室注射經(jīng)SBH-I誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞，應(yīng)用Y迷宮法檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化，以研究

5、SBH-I誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞在體內(nèi)模型中對(duì)神經(jīng)毒性損傷小鼠學(xué)習(xí)與記憶行為能力改善的情況。 結(jié)果： 1.用5-80μmol/L的SBH-I預(yù)處理PC12細(xì)胞，然后分別再加入100μmol/mLH2O2和100μmol/mLDXM造成損傷。MTT法與AO/EB熒光染色法檢測(cè)結(jié)果表明，與損傷模型組相比，濃度為10、20、40μmol/L的SBH-I不僅能促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖，還能夠提高H2O2及地塞米松誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)

6、胞的存活率，減少損傷，具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。其中，20μmol/mL的SBH-I作用最明顯。 2.用0.8-5.6mmol/L的SBH-I作用大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞，形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)PC12細(xì)胞在作用6h后就開始有部分細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)變化并長(zhǎng)出突起，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)突起的細(xì)胞以及突起的長(zhǎng)度都在增加。MTT測(cè)定結(jié)果表明，SBH-I作用24h，各作用濃度明顯的抑制PC12細(xì)胞增殖，促使其向神經(jīng)元分化。培養(yǎng)到第七天，免疫組