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1、本研究的目的是提取、分離和純化海洋生物Ⅰ號(hào)抗腫瘤活性組分,探討各組分對(duì)人Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞和人高分化鼻咽癌CNEl細(xì)胞兩種細(xì)胞系的作用。 [方法]乙醇冷浸漬法提取,石油醚、乙酸乙酯和正丁醇系統(tǒng)溶劑分離,大孔吸附樹(shù)脂柱層析法進(jìn)一步純化分離;MTT法測(cè)定各提取物對(duì)Raji、CNEl兩種細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制作用;細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響。 [結(jié)果]海洋
2、生物Ⅰ號(hào)經(jīng)提取分離得到3種提取物A、B和C,提取率分別為0.17%、0.14%和0.4%。抗腫瘤活性測(cè)定結(jié)果顯示,3種提取物對(duì)Raji細(xì)胞和CNEl細(xì)胞生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用,抑制率隨藥物濃度的增高而增高,其中提取物B作用最強(qiáng),提取物C次之,提取物A作用最弱。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,12h、24h和48h3個(gè)時(shí)間點(diǎn)提取物B和提取物C的抑制率比較,差異具有顯著性(P<0.05);A和B、A和C的抑制率兩兩比較,差異具有非常顯著性(P<0.01)
3、。提取物A、B和C作用于Raji細(xì)胞48h后的IC50值分別為399.77μg/ml、193.61μg/ml和204.90μg/ml,作用于CNEl細(xì)胞的IC50值分別為804.14μg/ml、397.65μg/ml和611.94μg/ml。不同濃度的提取物B均使Raji細(xì)胞和CNE1細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線變?yōu)榈推?,各濃度組與空白對(duì)照組相比,差異具有非常顯著性(P<0.01)。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果顯示,不同濃度的提取物B均可以引起兩種細(xì)胞系G1期
4、細(xì)胞增多,S期細(xì)胞減少,并存在明顯的量效關(guān)系。大孔吸附樹(shù)脂柱層析法將提取物C進(jìn)一步純化分離得到5個(gè)組分C1、C2、C3、C4和C5,提取率分別為46.92%、7.02%、3.57%、4.76%和8.57%??鼓[瘤活性測(cè)定結(jié)果顯示,C1、C2和C3組分對(duì)Raji和CNE1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用不明顯,而C4和C5組分對(duì)兩種細(xì)胞系的生長(zhǎng)均有顯著的抑制作用,C5組分的抑制作用最強(qiáng),且抑制率隨藥物濃度的增高而增高。C3和C2、C3和C1的抑制率差異
5、不大;其他的兩組間的比較,差異具有非常顯著性(P<0.01)。C1、C2、C3、C4和C5組分作用于Raji細(xì)胞48h后的IC50值分別為272.27μg/ml、8729.28μg/ml、3793.82μg/ml、113.49μg/ml和78.59μg/ml,作用于CNE1細(xì)胞48h后的IC50值分別為1675.27μg/ml、4021.66μg/ml、557.08μg/ml、181.31μg/ml和91.84μg/ml。 [結(jié)
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