健脾益腎、活血化瘀中藥復(fù)方對(duì)高糖刺激下大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及FN表達(dá)的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabeticnephropathy，DN)是糖尿病最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病和糖尿病患者死亡的重要原因。腎小球系膜細(xì)胞異常增殖是DN的關(guān)鍵性病理變化，腎小球系膜細(xì)胞通過(guò)分泌包括纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)、Ⅳ型膠原(collagenⅣ，ColⅣ)和層纖連蛋白在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致系膜區(qū)的擴(kuò)張并最終導(dǎo)致腎小球硬化。
　　 健脾益腎、活血化瘀中藥復(fù)方(traditionalChin

2、esemedicine，TCM)對(duì)糖尿病腎病具有良好的治療效果，不僅可減輕臨床癥狀，降低血脂，改善血液流變學(xué)異常，減少尿微量白蛋白（microalbuminuria,MALB）和改善腎功能，還可以降低糖尿病腎病模型大鼠增高的一氧化氮水平，降低血脂及尿微量白蛋白。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用高糖(30mmol/L)刺激大鼠腎小球系膜細(xì)胞模型，探討健脾益腎、活血化瘀中藥復(fù)方對(duì)高糖刺激下大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及纖維連接蛋白（fibronectin，

3、FN）表達(dá)的影響。
　　 方法:以大鼠腎小球系膜細(xì)胞(RMCs)為研究對(duì)象，應(yīng)用不同濃度的中藥復(fù)方藥液(0.3mg/mL、0.65mg/mL、1.25mg/mL、2.5mg/mL)分別處理RMCs24小時(shí)及48小時(shí)，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)中藥復(fù)方對(duì)RMCs的毒性。根據(jù)毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇0.3mg/mL、0.65mg/mL、1.25mg/mL中藥復(fù)方分別處理高糖刺激下的大鼠腎小球系膜細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)，并在對(duì)照組中

4、加入甘露醇做滲透壓對(duì)照，采用MTT法檢測(cè)RMCs的增殖情況，實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)FN的mRNA的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)FN蛋白的表達(dá)。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用0.65mg/mL中藥組處理RMCs48小時(shí)，采用Western-blot法檢測(cè)BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1、2.5mg/mL中藥復(fù)方對(duì)RMCs具有毒性。2、處理24h，高糖組細(xì)胞增殖率是對(duì)照組增殖率的1.38倍，處理48h，

5、高糖組增殖率是對(duì)照組的1.45倍;處理24h及48h，高糖組FN的mRNA分別是對(duì)照組的2.45倍和2.40倍，F(xiàn)N蛋白表達(dá)分別是對(duì)照組的1.8倍和1.9倍;24h時(shí)，中藥各組RMCs的增殖及FN的表達(dá)與高糖組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，48h時(shí)，0.65mg/mL和1.25mg/mLTCM組RMCs的增殖及FN的表達(dá)較高糖組明顯下降(p＜0.05)，0.3mg/mLTCM組RMCs的增殖較高糖組有下降趨勢(shì)。3、高糖處理RMCs48小

6、時(shí)，BMP-7的表達(dá)量和p-Smad1/5/8的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯下降。中濃度中藥復(fù)方處理高糖刺激的RMCs48小時(shí)，BMP-7的表達(dá)量和p-Smad1/5/8的表達(dá)較對(duì)照組明顯上升。對(duì)照組和各處理組Smad1/5/8的表達(dá)未見(jiàn)差別。
　　 結(jié)論:高糖處理24h及48h能夠使RMCs的增殖增加并上調(diào)FN的表達(dá)，中藥處理24h對(duì)高糖刺激的RMCs的增殖及FN表達(dá)的抑制作用不明顯，中藥處理48h能夠逆轉(zhuǎn)高糖刺激下RMCs的增殖并下