妊娠小鼠與新生小鼠機體的天然抗腫瘤效應及其機制研究.pdf

1、目的： ⑴探索妊娠小鼠機體與新生小鼠機體的抗肝癌（H22）效應； ⑵探討小鼠胚胎提取物對H22細胞增殖分化和凋亡的影響； ⑶探索治療肝癌的新的聯(lián)合用藥方案。 方法： ⑴妊娠小鼠抗癌效應實驗：妊娠昆明種小鼠15只為實驗組，無孕昆明種雌性小鼠15只為對照組，分別于腹膜腔內接種約1×105個小鼠肝癌細胞，觀測指標:①腫瘤生長情況；②接種癌細胞后的小鼠生存期。 ⑵新生小鼠抗癌效應實驗：昆明種新生小

2、鼠(出生24小時內)10只為實驗組，無孕成年雌性昆明種小鼠10只為對照組，分別于腹膜腔內接種約750個小鼠肝癌細胞，觀測指標:①腫瘤生長情況；②接種癌細胞后的小鼠生存期。 ⑶細胞實驗，分別用小鼠胚胎提取物（E）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、全反式維甲酸（ATRA）處理H22癌細胞，使用細胞計數(shù)和MTT比色法檢測不同時間點H22癌細胞的增殖情況；使用姬姆薩染色觀察處理前后H22癌細胞的形態(tài)變化情況；使用堿性磷酸酶（ALP）和γ-L-

3、谷氨酰轉肽酶（γ-GT）試劑盒檢測處理后的H22癌細胞ALP和γ-GT的活性以探討H22肝癌細胞的分化程度；采用流式細胞分析儀分析處理后的H22癌細胞凋亡情況。 結果： ⑴妊娠動物抗癌效應實驗：實驗觀察60天,15只實驗組小鼠中有5只無腫瘤生長；另10只腫瘤生長緩慢, 接種癌細胞后的平均生存期為36.3±1.95天。無孕雌性小鼠腫瘤生長迅速,接種癌細胞后的平均生存期為20.67±2.35天。 ⑵新生小鼠抗癌效應實

4、驗：新生小鼠腫瘤生長緩慢，平均生存期34.9±1.45天。成年小鼠腫瘤生長迅速，接種癌細胞后的平均生存期24.8±2.30天。 ⑶細胞實驗，①細胞形態(tài)變化：對照組細胞大小不一，細胞核大，核漿比例大；2.5％胚胎提取物（E）處理后，細胞大小比較均一，核漿比例變小，可見部分凋亡細胞。②胚胎提取物（E）對H22細胞增殖分化和凋亡的影響：MTT實驗結果顯示胚胎提取物能有效抑制H22細胞的分裂，且呈一定的時間和藥物濃度依賴性；與對照組比較

5、，胚胎提取物（E）處理H22細胞120小時后，γ-GT比活性降低，ALP比活性升高，提示H22細胞向成熟分化；流式細胞儀凋亡率檢測，2.5％胚胎提取物物能誘導H22細胞凋亡，與對照組比較，差異有非常顯著性意義；③5-FU+ATRA+胚胎提取物（E）抑制H22細胞增殖、誘導H22細胞分化和促進H22細胞凋亡效果最好：細胞計數(shù)結果顯示5-FU+ATRA+胚胎提取物（E）合用組細胞數(shù)比其他組少，γ-GT比活性較其他組低，ALP比活性較其他組高