逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小鼠白細胞介素-23抗腫瘤效應(yīng)及其機理研究.pdf

1、No20031013河必蓮鈄六蠆I學(xué)校代碼11919I中幽分類lj博士研究生畢業(yè)論文逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小鼠白細胞介素23抗腫瘤效應(yīng)及其機理研究研究生導(dǎo)師專業(yè)：級學(xué)院郝京生單保恩教授免疫學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院2003年3月一2004年12月2005年4月中文摘要問題有待于進‘步研究。本研究主要目的是深入探討IL一23的抗腫瘤效應(yīng)、作用機理及其抗肝轉(zhuǎn)移的作用，以便為臨床應(yīng)用提供實驗和理論依據(jù)。第一部分逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小鼠IL23基因在小鼠結(jié)腸癌細胞

2、中的表達目的：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒作為載體將小鼠IL23(mIL23)基因轉(zhuǎn)染小鼠結(jié)腸癌細胞(colon26)，建立分泌IL23的腫瘤細胞株(Colon26／IL一23)，并對其生長特點進行研究，為深入研究IL23的抗腫瘤作用奠定基礎(chǔ)。方法：將攜帶mIL一23基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(LxSN／IL23)，經(jīng)過v2和PA317包裝細胞兩次包裝，利用該逆轉(zhuǎn)錄病毒將mIL一23基因?qū)隿olon26細胞，經(jīng)G418篩選后獲得表達mIL23的陽性細胞克

3、隆colon26／IL23。用PcR和RT_PcR檢測目的基因的表達，’：鸚町ELIsA法檢測mIL23的產(chǎn)生及mIL23誘導(dǎo)的小鼠脾細胞IFN叫的產(chǎn)生，用MTT比色法檢測腫瘤細胞的體外增殖。用流式細胞儀分析Colon26／IL一23細胞表面H2Kb(MHCI類分子)、IAb(MHCII類分子)、CD80和CD86的表達。結(jié)果：1分泌攜帶IL一23基因逆轉(zhuǎn)錄病毒(病毒滴度為3—5103CFU佃1)的PA317／IL23細胞株有mIL23

4、mRNA的表達，培養(yǎng)上清中能檢測到mIL一23(3002Op∥lnl)，其分泌的逆轉(zhuǎn)錄病毒可用于轉(zhuǎn)染腫瘤細胞。2建立了能表達mIL一23p19mRNA并分泌mIL一23(95133p∥m1)的Colon26／IL23細胞株。經(jīng)PCR證實，外源mIL23基因已整合到Colon26／IL23細胞的基因組中。在ConA存在下，Colon26／IL一23細胞的培養(yǎng)上清誘導(dǎo)小鼠脾細胞分泌的IFNY為35026p∥ml，明顯高于Colon26／Lx

5、SN細胞和Colon26細胞的培養(yǎng)上清所誘導(dǎo)的IFN—v含量(分別為41O3p∥1nI和4506pl；／m1)(p001)。Colon26／IL23細胞在體外的細胞形態(tài)和生長速度與Colon26／LxSN和Colon26細胞無明顯差別。與C010n26細胞相比較，Colon26／IL23細胞表面H2Kb和IAb的表達水平明顯下降(p001)；CD80和CD86的表達水平明顯提高(f，001)。結(jié)論：Colon26／IL23細胞能夠分泌I