受控凋亡素基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡研究.pdf

1、暨南大學(xué)周覓匕學(xué)位論文受控凋亡素基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡研究作者顧紅祥指導(dǎo)教師朱惠明博士副教授學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)、消化系統(tǒng)疾病的研究論文提交日期二零零三年四月二十三日論文答辯日期二零零三年五月二十二日答辯委員會(huì)主席胡品津教授論文評(píng)閱人李紹白教授李富榮副研究員學(xué)位授予單位和日期摘要目的構(gòu)建可經(jīng)四環(huán)素調(diào)控的重組凋亡素基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，觀察受四環(huán)素調(diào)控的凋亡素基因的表達(dá)對(duì)人肝癌細(xì)胞的影響。方法將凋亡素基因克隆入逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載

2、體，構(gòu)建出重組載體一。質(zhì)粒載體一一以磷酸鈣共沉淀法分別轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，經(jīng)抗生素篩選及病毒滴度測(cè)定選取穩(wěn)定產(chǎn)病毒的包裝細(xì)胞株和。取和細(xì)胞病毒上清液依次感染人肝癌細(xì)胞系，用抗生素篩選出抗性細(xì)胞株。通過(guò)向培養(yǎng)液中加入或去除四環(huán)素調(diào)控凋亡素基因在細(xì)胞中的表達(dá)，一爪雙染色后，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定，凋亡素基因被正確克隆到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體篩選出穩(wěn)定產(chǎn)病毒的包裝細(xì)胞株和那，其病毒滴度分別為少刀和龍互獲得可經(jīng)四環(huán)素調(diào)控凋亡素基因表