白術(shù)ISSR與質(zhì)量研究.pdf

1、目的:摸索適合白術(shù)基因組DNA提取方法，篩選白術(shù)ISSR引物，建立ISSR-PCR反應(yīng)體系，檢測(cè)白術(shù)ISSR分子標(biāo)記，分析不同產(chǎn)地白術(shù)的遺傳關(guān)系與白術(shù)多糖含量指標(biāo)的變化情況，從而為白術(shù)的遺傳育種，品種改良提供科學(xué)參考。
　　方法：采用改良CTAB法和常規(guī)SDS法兩種方法對(duì)比提取白術(shù)基因組DNA，運(yùn)用單因素影響試驗(yàn)建立ISSR-PCR反映體系，通過(guò)NTSYS-pc version-2.11f計(jì)算機(jī)軟件構(gòu)建聚類樹(shù)狀圖，結(jié)合紫外分光法檢

2、測(cè)白術(shù)多糖含量，對(duì)8個(gè)產(chǎn)地的白術(shù)（陜西延安，西安，四川，安徽，浙江，湖南懷化，貴陽(yáng)，貴州銅仁）遺傳關(guān)系和質(zhì)量進(jìn)行分析研究。
　　結(jié)果:1.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同水浴時(shí)間,不同的CTAB與SDS濃度，不同的離心轉(zhuǎn)速對(duì)基因組 DNA提取進(jìn)行了分析，從而獲得了最適合白術(shù)的ISSR-PCR反應(yīng)體系為改良CTAB法提取基因組DNA。其OD值在1.8～1.9范圍內(nèi)，表明其為高純度的DNA。
　　2.通過(guò)紫外分光光度法，檢測(cè)多糖的吸收峰為490n

3、m，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線.測(cè)定樣品吸光度，計(jì)算白術(shù)多糖含量分布在6.37％～32.6%之間，顯示出8個(gè)產(chǎn)地白術(shù)之間的多糖含量差異較大。
　　3.采用優(yōu)化的白術(shù)ISSR-PCR的最佳反應(yīng)體系從菊科中的眾多引物中篩選出3條用于指紋圖譜構(gòu)建的引物：ISSR-18、ISSR-24、ISSR-36。計(jì)算每個(gè)引物的條帶數(shù)，從而獲得白術(shù)居群的相似系數(shù)。用 NTSYS-pc version-2.11f軟件計(jì)算任意樣品間的遺傳相似度、遺傳距離，構(gòu)建聚類圖。