A類清道夫受體與葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78相互作用的研究.pdf

1、A類清道夫受體(Class A scavenger receptor，SR-A)是一種主要位于巨噬細(xì)胞表面的三聚體跨膜糖蛋白，能夠識(shí)別多種配體。SR-A介導(dǎo)的對(duì)化學(xué)修飾的低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)的內(nèi)吞可以導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的聚集，并引起動(dòng)脈粥樣硬化。SR-A的胞漿結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的脂質(zhì)內(nèi)吞、細(xì)胞黏附以及受體在細(xì)胞表面的表達(dá)等過程。 我們先期的研究表明，利用GST pull-down

2、的方法可以找到一種與SR-A胞漿域特異性結(jié)合的的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucose regulated protein 78，GRP78)。在本研究中，利用免疫共沉淀的方法驗(yàn)證了在細(xì)胞裂解液中GRP78和SR-A的特異性結(jié)合。利用RNA干擾技術(shù)抑制GRP78表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞SR-A表達(dá)水平?jīng)]有受到影響，GRP78與SR-A的結(jié)合能力沒有明顯的改變，但是SR-A對(duì)乙?；疞DL(acLDL)的攝取能力降低。建立SR-A受體穩(wěn)定表達(dá)的H

3、EK293-SR-A細(xì)胞株，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在有acLDL存在時(shí)，GRP78和SR-A在細(xì)胞內(nèi)的結(jié)合減少，同時(shí)細(xì)胞對(duì)acLDL的內(nèi)吞速率增加。利用免疫共沉淀結(jié)合二維電泳、質(zhì)譜分析的方法進(jìn)一步研究GRP78和SR-A的反應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)可能與GRP78和SR-A共同作用的蛋白質(zhì)，提示它們可能在SR-A-GRP78反應(yīng)通路中起一定作用。增加GRP78的表達(dá)水平可以使SR-A介導(dǎo)的腫瘤壞死因子(TNF-α)分泌增加，這種調(diào)節(jié)作用可能與MA