微囊蛋白-3在雌激素抑制去勢(shì)雌性大鼠心肌肥大中的作用.pdf

1、目前認(rèn)為,左室肥厚是影響原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)患者病殘率和死亡率的—個(gè)重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。因此,逆轉(zhuǎn)左室肥厚已成為當(dāng)前治療EH的重要目標(biāo)之一。左室肥厚的細(xì)胞病理學(xué)基礎(chǔ)不僅表現(xiàn)在心肌實(shí)質(zhì)細(xì)胞的肥大,還有心臟成纖維細(xì)胞(CFs)的過度增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)大量沉積,導(dǎo)致心肌纖維化。左心室肥厚是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,隨著左心室肥厚的發(fā)生、發(fā)展,猝死、

2、冠心病、心肌缺血、心力衰竭等心血管事件的發(fā)生率顯著增加。
　　 流行病學(xué)資料顯示,EH左室肥厚患者的發(fā)病率和死亡率與性別顯著相關(guān),女性絕經(jīng)前與同齡男性比較,EH的病夕匕率顯著低于男性,而卵巢切除或絕經(jīng)后的婦女心血管疾病發(fā)病率與死亡率明顯增高,與同齡男性比較無顯著性差異。表明EH左室肥厚的發(fā)生發(fā)展與雌激素有關(guān)。臨床資料證實(shí),在標(biāo)準(zhǔn)降壓治療基礎(chǔ)上給予絕經(jīng)后EH女勝患者17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)可使左心室重量進(jìn)

3、一步降低,提示E2可能具有逆轉(zhuǎn)左室肥厚的作用。
　　 現(xiàn)已證明,雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)效應(yīng),可以通過調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)血壓、對(duì)心臟的直接作用,以及觸發(fā)一些心臟保護(hù)因子的釋放等來抑制多種刺激因素所致的心肌肥大反應(yīng)。雌激素的效應(yīng)是由雌激素受體(estrogen receptor,ER)介導(dǎo)的,ER的存在是E2發(fā)揮效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。心血管系統(tǒng)存在著雌激素受體,雌激素在與ER結(jié)合后,可以通過基因效應(yīng)和非基因效應(yīng)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),影響靶

4、基因的轉(zhuǎn)錄,調(diào)節(jié)功能蛋白的合成,從而發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。如改善血脂代謝,抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)血管內(nèi)皮損傷的修復(fù)等。而絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinases,MAPKs)信號(hào),G蛋白、酪氨酸激酶、P13K/Akt信號(hào)等信號(hào)途徑可能參與了雌激素的效應(yīng)。那么在雌激素對(duì)高血壓及其引起的心肌肥大有什么影響?是不是可以抑制高血壓引起的心肌肥大呢?且ERK2/1和Ak

5、t信號(hào)在其中有什么作用?目前還未完全明了
　　 近年來,許多研究表明細(xì)胞質(zhì)膜微囊(caveolae)在多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起樞紐作用,其標(biāo)志性結(jié)構(gòu)蛋白微囊蛋白(caveolin)可對(duì)許多關(guān)鍵信號(hào)分子的活性狀態(tài)起著直接的調(diào)節(jié)作用,在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)室以往的研究已經(jīng)證實(shí)了caveolin-1能夠抑制血管平滑朋細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖,雌激素可以通過促進(jìn)caveo

6、lin-1的表達(dá)發(fā)揮血管保護(hù)作用,抑制ERK1/2的活化,調(diào)節(jié)NOS的活性。那么caveolin是否參與了雌激素對(duì)心臟的保護(hù)效應(yīng),在其發(fā)揮什么作用呢?
　　 綜上所述,本課題從研究caveolin入手,探討了雌激素對(duì)壓力超負(fù)荷心肌肥大的影響,通過腹主動(dòng)脈縮窄建立去勢(shì)雌性大鼠壓力超負(fù)荷動(dòng)物模型,分別給予雌激素和安慰劑,通過子宮大小判斷模型建立是否成功；通過超聲心動(dòng)圖檢測(cè)大鼠心臟功能及心肌肥大情況；取組織做石蠟切片,HE染色觀察心肌

7、肥大情況；免疫印跡方法探討整體情況下雌激素對(duì)壓力超負(fù)荷時(shí)信號(hào)蛋白表達(dá)的影響；培養(yǎng)新生SD大鼠心肌細(xì)胞,用AngⅡ刺激其發(fā)生吧大反應(yīng),采用Bradford法、同位素法、免疫印跡等技術(shù),檢測(cè)雌激素對(duì)心肌細(xì)胞肥大的影響,觀察ERK1/2、P13K/Akt通路在其中的作用,探討caveolin-3是否是其關(guān)鍵分子,及雌激素對(duì)其的影響。從整體、細(xì)胞、分子水平分別研究17β-雌二醇對(duì)壓力超負(fù)荷導(dǎo)致的心臟肥大的影響,探討caveolin在雌激素心臟保

8、護(hù)效應(yīng)中作用,以加深對(duì)雌激素生物效應(yīng)及其作用的分子機(jī)制的認(rèn)識(shí),為臨床高血壓心臟病的防治提供新的思路。
　　 本論文主要包括以下三個(gè)部分:
　　 第1章:17β-雌二醇對(duì)去勢(shì)高血壓大鼠心肌肥大的影響
　　 第2章:ERK1/2和Akt信號(hào)在17β-雌二醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的作用
　　 第3章:微囊蛋白-3在17β-雌二醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的作用
　　 第1

9、章:17β-雌二醇對(duì)去勢(shì)高血壓大鼠心肌肥大的影響
　　 本章重點(diǎn)討論卵巢切除雌性SD大鼠,給予17β-雌二醇對(duì)腹主動(dòng)脈縮窄引起的血壓升高、心功能改變和心肌肥大的影響。150g～200g雌性SD雌性大鼠140只,卵巢切除后隨機(jī)分成:假手術(shù)組(sham)和腹主動(dòng)脈縮窄(abdominal aorta constriction,AAC)組。Sham組又隨機(jī)分為雌激素組(E2)和安慰劑組(placebo,P),AAC組也隨機(jī)分為雌激素組

10、(E2)和安慰劑組(placebo,P)。術(shù)后恢復(fù)1周,雌激素補(bǔ)充治療組(E2組)補(bǔ)充17β-雌二醇20μg/kg/d,安慰劑組(P組)給予溶劑對(duì)照,8周后做超聲心動(dòng)圖檢測(cè)后處死,取子宮和心臟組織。
　　 1.1去勢(shì)及給予E2對(duì)大鼠子宮重量的影響
　　 術(shù)后8周,安慰劑組與雌激素替代組比較,AAC和sham組子宮分別縮小(83.61±3.5)％(OVX+AAC+P vs OVX+AAC+E2,P<0.05)和(83.06

11、±1.75)％(OVX+sham+P vsOVX+sham+E2,P<0.05)。
　　 1.2 HE常規(guī)染色
　　 HE染色見OVX+sham組心肌細(xì)胞呈梭形,核清藍(lán)色,肌纖維呈深紅色,胞漿淡紅色。腹主動(dòng)脈縮窄使左室心室肌細(xì)胞橫徑(LVTDM)分別增加(24.08±6.52)％,(OVX+AAC+E2vs OVX+sham+E2組,P<0.05),(41.64±3.75)％(OVX+AAC+P vs OVX+sham+

12、P組,P<0.05)。腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后,給予E2和給予安慰劑比較,左室心室肌細(xì)胞橫徑(LVTDM)減少(23.4±3.75)％(OVX+AAC+E2 vs OVX+AAC+P組,P<0.05)。而假手術(shù)組,給予雌激素組與安慰劑組比較左室心室嘰細(xì)胞橫徑(LVTDM)無明顯差異,(OVX+sham+E2vs OVX+sham+P組,P>0.05)。
　　 1.3心臟/體重比值和大鼠超聲心動(dòng)圖
　　 與假手術(shù)組比較,AAC術(shù)后

13、心臟/體重比值顯著增加,P<0.05。而在AAC組,給與雌激素與給與安慰劑組比較,安慰劑組心臟/體重比值增加較給予雌激素組明顯,P<0.05。
　　 AAC組術(shù)后8周IVSd、LVSs較sham組,明顯增厚,P<0.05。FS、EF較術(shù)前明顯減低,P<0.05。而E2可抑制FS、EF的減少P<0.05。
　　 1.4免疫印跡檢測(cè)心臟組織ERK1/2的活性
　　 AAC可以大鼠心臟組織中的ERK1/2活性增加(AA

14、C VS sham P<0.05)。在AAC組給予E2可以抑制ERK1/2活性的增加,與安慰劑組比較,E2可以使ERK1/2活性降低(32.84±1.61)％(OVX+AAC+E2 vs OVX+AAC+P組,P<0.05)。而sham組磷酸化ERK1/2表達(dá)的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.5免疫印跡檢測(cè)心臟組織Akt的活性
　　 AAC組大鼠心臟組織中的磷酸化Akt增加(AAC VS sham,P<0.05)。在AAC

15、組給予E2可以抑制磷酸化Akt的增加,與安慰劑組比較,給予E2可以使Akt瞵酸化降低(39.46±6.24)％(AAC+E2 vs AAC+P組,P<0.05)。而sham組磷酸化Akt表達(dá)的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.6免疫印跡檢測(cè)心臟組織caveolin-3的表達(dá)
　　 Caveolin-3是心肌細(xì)胞caveolae的標(biāo)志蛋白。與假手術(shù)組比較AAC可以使caveolin-3表達(dá)下降(AAC VS sham P<0.

16、05)。在AAC細(xì)給予E2能使之增加,與安慰劑組比較,給予E2可以使aveolin-3增加(26.11±7.3)％(AAC+E2 vs AAC+P組,P<0.05)。在sham組caveolin-3的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 小結(jié):
　　 1.在去勢(shì)雌性SD大鼠腹主動(dòng)脈縮窄模型中可以觀察到心肌肥大,ERK1/2和Akt活性的增加及caveolin-3表達(dá)減少。
　　 2.給予雌激素可以抑制心肌肥大,抑制ERK1/

17、2和Akt的活化及caveolin-3表達(dá)的減少。
　　 3.在去勢(shì)雌性SD大鼠腹主動(dòng)脈縮窄模型給予雌激素可能是通過促進(jìn)caveolin-3表達(dá)抑制ERK1/2和Akt活性的增加,進(jìn)而抑制心肌肥大。
　　 第2章:ERK1/2和Akt信號(hào)在17β-雌二醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的作用
　　 本章主要在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞探討了17β-雌二醇對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響。
　　

18、 2.1心肌細(xì)胞活性測(cè)定
　　 細(xì)胞活力=活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)),本實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞活力在95％以上。
　　 2.2心肌細(xì)胞的形態(tài)和鑒定
　　 用胰酶消化分離的新生SD大鼠肌細(xì)胞在培養(yǎng)4～24h后,在倒置顯微鏡下可觀察到心肌細(xì)胞開始貼壁生長(zhǎng),初呈圓形,后為梭形,偶見單個(gè)細(xì)胞開始搏動(dòng),繼而細(xì)胞逐漸在瓶壁表面鋪展,形成不規(guī)則的星形,并伸出偽足,48h后形成細(xì)胞單層或細(xì)胞簇,呈放射狀排列的同心圓狀,其搏動(dòng)同

19、步化,在含10％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中,搏動(dòng)頻率約為80～150次/min,不同細(xì)胞簇的搏動(dòng)頻率可有不同,在培養(yǎng)過程中,隨著細(xì)胞間逐漸融合,亦可見整瓶心肌細(xì)胞的同步化搏動(dòng)。用抗大鼠α-sacomericactin抗體,SABC免疫組化法進(jìn)行鑒定,胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒者為陽性。鑒定結(jié)果顯示培養(yǎng)細(xì)胞陽性率達(dá)90％以上,表明細(xì)胞純度已經(jīng)達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。
　　 2.3 E2對(duì)AngⅡ作用于心肌細(xì)胞48小時(shí)后心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量的影響

20、>　　 10-7mol/L的AngⅡ作用48小時(shí)誘導(dǎo)蝴胞蛋白含量增加(54.81±6.45)％(vs control組,P<0.05),17β-雌二醇可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量的增加。10-12mol/L、10-10mol/L、10-8mol/L E2分別使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量的增加下降(12.03±4.21)％,(15.99±5.67)％,(21.47±7.1)％(vs AngⅡ組),單獨(dú)使用10-8mol

21、/L的17β-雌二醇對(duì)心肌細(xì)胞蛋白含量沒有顯著影響。
　　 10-8mol/L的17β-雌二醇分別作用4,12,24小時(shí)可使10-7mol/L的AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白含量增加減少(11.74±5.43)％,(17.64±4.45)％,(25.68±7.44)％(vs AngⅡ組,P<0.05)。
　　 2.4 E2對(duì)AngⅡ作用心肌細(xì)胞48小時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞表面積的影響
　　 10-7mol/L的AngⅡ誘導(dǎo)心肌

22、細(xì)胞表面積增加(48.98±2.23)％(vs control組,P<0.05),17β-雌二醇可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞表面積的增加。10-12mol/L、10-10mol/L、10-8mol/L E2分別使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞表面積的增加下降(9.42±1.88)％(14.98±4.89)％,(22.10±4.78)％(vs AngⅡ組),單獨(dú)使用10-8mol/L雌激素對(duì)心肌細(xì)胞表面積沒有顯著影響。
　　 10-8m

23、ol/L的17β-雌二醇分別作用4,12,24小時(shí)可以使10-7mol/L的AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞表面積增加減少(12.66±1.88)％,(19.61±4.89)％,(24.63±4.78)％(vs AngⅡ組)。
　　 2.5 E2對(duì)AngⅡ作用于心肌細(xì)胞48小時(shí)后[3H]-亮氨酸摻入的影響
　　 10-7mol/L的AngⅡ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加(85.62±11.62)％(vs control組,P

24、<0.05),17β-雌二醇可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入的增加。10-12mol/L、10-10mol/L、10-8mol/L E2分別使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮酸摻入增加下降(10.73±3.38)％(14.64±6.7)％(20.63±9.76)％(vs AngⅡ組),單獨(dú)使用10-8mol/L的17β-雌二醇對(duì)心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入沒有顯著影響。
　　 10-8mol/L的17β-雌二

25、醇作用4,12,24小時(shí)可以分別使10-7mol/L的AngⅡ誘導(dǎo)的心朋細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加減少(9.34±9.03)％,(16.65±13.59)％,(24.59±8.66)％(vsAmgⅡ組)。
　　 2.6雌激素受體拮抗劑Tamoxifen(Ta)對(duì)E2抑制心肌肥大的影響
　　 與對(duì)照組相比,10-7mol/L AngⅡ可使心肌細(xì)胞蛋白合成增加(60.72±8.17)％(vs control組,P<0.05

26、)；該作用可被10-8mol/L E2預(yù)處理24h后明顯抑制,抑制率為(21.19±9.66)％(vs AngⅡ組,P<0.05)；預(yù)先給予10-6mol/L Ta作用30mins,可部分抑制E2降低AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白合成增加的作用,抑制率為(24.24±7.26)％(vs E2+AngⅡ組,P<0.05)；AngⅡ組與AngⅡ+E2+Ta組之間無顯著性差異(P>0.05)；單獨(dú)給予Ta對(duì)心肌細(xì)胞蛋白合成沒有顯著影響(vs co

27、ntrol組,P>0.05)。
　　 與對(duì)照組相比,10-7mol/L AngⅡ可使心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加(67.18±10.06)％(vs control組,P<0.05)；該作用可被10-8mol/L E2預(yù)處理24h后明顯抑制,抑制率為(21.85±7.09)％(vs AngⅡ組,P<0.05)；預(yù)先給予10-6mol/L Ta作用30mins,可部分抑制E2降低AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加的作

28、用,抑制率為(25.01±11.89)％(vs E2+AngⅡ組,P<0.05)；AngⅡ組與AngⅡ+E2+Ta組之間無顯著性差異(P>0.05)；單獨(dú)給予Ta對(duì)心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入沒有顯著影響(vs control組,P>0.05)。
　　 2.7 ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在E2抑制心肌細(xì)胞肥大中的變化
　　 2.7.1 E2對(duì)心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中ERK1/2活性的影響
　　 與對(duì)照組比較,10-7mo

29、l/L AngⅡ能使蝴胞的磷酸化ERK1/2增加(177.12±14.6)％(vs control組,P<0.05),預(yù)先給予10-8mol/L E2使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ERK1/2活性增加降低(vs AngⅡ組,P<0.05),ER拮抗劑Ta預(yù)處理30mins可逆轉(zhuǎn)E2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ERK1/2活性增加的抑制作用(vs E2組,P<0.05),單獨(dú)給予E2和Ta對(duì)ERK1/2磷酸化無顯著影響(vs control組,P>

30、0.05)。
　　 2.7.2 PD98059對(duì)E2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響
　　 與對(duì)照組相比,10-7mol/L AngⅡ可使心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加(70.82±8.37)％(vscontrol組,P<0.05)；10-8mol/L E2預(yù)處理24h使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入減少,其抑制率為(20.8±9.97)％(vs AngⅡ組,P<0.05)；PD98059(50μm

31、ol/L)預(yù)處理1h可以抑制E2使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入減少的作用,其抑制率為(28.74±8.7)％(vs AngⅡ組,P<0.05)。
　　 2.73 E2對(duì)心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)時(shí)MKP-1蛋白表達(dá)的影響
　　 10-7mol/L AngⅡ作用可增加心肌細(xì)胞MKP-1蛋白的表達(dá)增加(vs control組,P<0.05),事先用E2預(yù)處理,可以加強(qiáng)AngⅡ促進(jìn)MKP-1蛋白表達(dá)增加的作用(vs Ang

32、Ⅱ組,P<0.05)。單獨(dú)給予E2對(duì)MKP-1表達(dá)無明顯影響(vs control組,P>0.05)。
　　 2.8 P13K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在E2抑制心肌細(xì)胞肥大中的變化
　　 2.8.1 E2對(duì)心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中Akt活性的影響
　　 與對(duì)照組比較,10-7mol/L AngⅡ能使心肌細(xì)胞的磷酸化Akt增加(140.7±5.69)％(vscontrol組,P<0.05),給予10-8mol/L E2預(yù)處理

33、使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞磷酸化Akt增加降低了(41.82±4.13)％(vs AngⅡ組,P<0.05),ER拮抗劑Ta預(yù)處理30mins可逆轉(zhuǎn)E2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞磷酸化Akt增加的作用(vs E2組,P<0.05),提示E2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的Akt磷酸化噌加的作用至少部分是通過ER介導(dǎo)的。而單獨(dú)始予E2對(duì)Akt磷酸化無明顯影響(vs control組,P>0.05)。
　　 2.8.2 LY294002對(duì)E2抑制A

34、ngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響
　　 與對(duì)照組相比,10-7mol/L AngⅡ可使心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加(73.93±11.31)％(vs control組,P<0.05)；10-8mol/L E2預(yù)處理24h使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入減少(21.21±10.21)％(vs AngⅡ組,P<0.05)；LY294002使E2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加的抑制作用加強(qiáng),抑制率為

35、(30.06±7.06)％(vs AngⅡ組,P<0.05),提示Akt的激活參與了AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng),而E2可通過抑制Akt的激活從而抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)。
　　 小結(jié):
　　 1.在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞,雌激素可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的蛋白合成增加、細(xì)胞表面積增大和[3H]-亮氨酸摻入增加。
　　 2.在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞,雌激素可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的磷酸化ERK1/2增加

36、,促進(jìn)MKP-1的表達(dá)。雌激素通過促進(jìn)MKP-1表達(dá)抑制磷酸化ERK1/2增加進(jìn)而抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)。
　　 3.在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞,雌激素可以抑制AngⅡ誘導(dǎo)的磷酸化Akt的增加。雌激素可以通過抑制磷酸化Akt的增加發(fā)揮效應(yīng)。
　　 第3章:微囊蛋白-3在17β-雌二醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的作用
　　 在原代培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌細(xì)胞,用AngⅡ誘導(dǎo)發(fā)生肥大反應(yīng),觀

37、察caveolin-3在雌激素抑制心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的作用。
　　 3.1 E2抑制心肌細(xì)胞肥大過程中caveolin-3表達(dá)的變化
　　 10-7mol/L AngⅡ可明顯降低caveolin-3蛋白的表達(dá)(Vs control組,P<0.05),提前用17β-雌二醇預(yù)處理細(xì)胞,可顯著增加AngⅡ作用后caveolin-3蛋白表達(dá)(vs AngⅡ組,P<0.05)。用了雌激素受體抑制劑Ta提前孵育細(xì)胞30mins,可以

38、抑制E2的作用,caveolin-3蛋白表達(dá)下降(vs E2+AngⅡ,P<0.05,),而單獨(dú)給予E2對(duì)caveolin-3的表達(dá)沒有影響。
　　 3.2 caveolin阻斷劑M-β-CD對(duì)E2抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響
　　 與對(duì)照組相比,10-7mol/L AngⅡ可使心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入增加(74.37±8.2)％(vscontrol組,P<0.05)；10-8mol/L E2預(yù)處理24h

39、使AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞[3H]-亮氨酸摻入減少(43.58±5.48)％(vs AngⅡ組,P<0.05)；M-β-CD(10-3mol/L)預(yù)處理心肌細(xì)胞2h,使E2對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的抑制作用減弱(vs E2+AngⅡ組,P<0.05)。
　　 3.3 caveolin阻斷劑M-β-CD對(duì)E2調(diào)節(jié)磷酸化ERK1/2效應(yīng)的影響
　　 為了探討caveolin-3在E2調(diào)節(jié)磷酸化ERK1/2蛋白表達(dá)過程中

40、的作用,我們使用了caveolin阻斷劑M-β-CD(10-3mol/L)預(yù)處理心肌細(xì)胞2h,可逆轉(zhuǎn)17β-雌二醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化的效應(yīng)。
　　 3.4 caveolin阻斷劑M-β-CD對(duì)E2調(diào)節(jié)磷酸化Akt效應(yīng)的影響
　　 為了探討caveolin-3在E2調(diào)節(jié)磷酸化Akt蛋白表達(dá)過程中的作用,我們使用了caveolin阻斷劑M-β-CD(10-3mol/L)預(yù)處理心肌細(xì)胞2h,可逆轉(zhuǎn)17β-雌二

41、醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)的Akt磷酸化的效應(yīng)。
　　 小結(jié):雌激素可以通過促進(jìn)caveolin-3的表達(dá)抑制AngⅡ誘導(dǎo)的ERK1/2和Akt活性增加,進(jìn)而抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。
　　 結(jié)論:
　　 1.在去勢(shì)雌性SD大鼠腹主動(dòng)脈縮窄模型中可以觀察到壓力超負(fù)荷引起的心肌肥大,ERK1/2和Akt活性的增加及caveolin-3表達(dá)減少。雌激素可以抑制壓力超負(fù)荷導(dǎo)致的心肌肥大,可能是通過促進(jìn)caveolin-3