HIF在糖尿病心肌肥大中的作用.pdf

1、目的:
　　在體外細胞實驗中研究HIF在糖尿病心肌肥大中的作用。
　　方法:
　　第一步:建立心肌肥大模型:H9C2細胞在饑餓培養(yǎng)基中培養(yǎng)18小時后，再用PE100uM培養(yǎng)48小時，光學(xué)顯微鏡下拍照。第二步:肥大模型建立好后化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)缺氧，參照文獻予DFO100uM48小時處理細胞。第三步:分組實驗，以六孔板進行實驗，分別在（短期和長期）高糖（細胞培養(yǎng)基糖濃度25 mM）和正常糖（細胞培養(yǎng)基糖濃度5.5 mM）條件下

2、用PE、PE和DFO、PE和DFO和HIF-1a基因沉默組處理細胞，培養(yǎng)48小時后提取總蛋白，利用Western Blot檢測糖酵解相關(guān)的蛋白，如Glut-1、HXK-Ⅱ、Enloase和凋亡相關(guān)蛋白，如Bcl-2、Bax和Caspase3的表達，同時在同樣分組的情況下利用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.苯腎上腺素(PE)可以誘導(dǎo)H9C2心肌細胞肥大:光學(xué)顯微鏡下正常H9C2心肌細胞呈長梭形，細胞核圓大居中;經(jīng)

3、PE處理48小時后，心肌細胞明顯變大，形狀偏圓或橢圓，細胞質(zhì)明顯膨脹，細胞核亦可見稍變大。
　　2.HIF-1α有助于緩解心肌細胞形態(tài)的肥大:在光學(xué)顯微鏡下可見:NG情況下，經(jīng)PE處理的H9C2心肌細胞輕微肥大，給予DFO誘導(dǎo)HIF-1α的產(chǎn)生，細胞形態(tài)有所緩和。HG情況下，給予PE心肌細胞肥大程度比較明顯，給予DFO后心肌細胞的肥大緩和不明顯。HIF-1α沉默之后基本上心肌細胞的肥大形態(tài)都沒有太大變化。
　　3.Weste

4、rn Blot檢測與糖酵解相關(guān)蛋白的表達:與正常相比，在長期高糖條件下HIF-1α的降低可引起Glut-1、HXK-2和Enloase的表達減少。統(tǒng)計分析高糖條件和正常糖條件下PE和DFO處理組，各蛋白質(zhì)有顯著性差異，P值小于0.05。
　　4.Western Blot檢測與凋亡相關(guān)蛋白的表達:與正常相比，在長期高糖下HIF-1α表達降低，同時Bcl-2表達降低，活化的Caspase3表達增加。統(tǒng)計分析高糖條件和正常糖條件下PE和

5、DFO處理組，Bcl-2和caspase3有顯著性差異，P值小于0.05。
　　5.流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡:在短期高糖條件下，HIF-1α介導(dǎo)肥大心肌細胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　HIF-1在糖尿病心肌肥大中有作用:HIF-1有助于緩解心肌細胞的肥大;長期高糖條件下，HIF-1α的降低可引起肥大心肌細胞糖酵解相關(guān)蛋白，如Glut-1、HXK-2和Enloase的表達減少;長期高糖條件下，可引起肥大心肌細胞凋亡蛋白Casp