FAT10調(diào)控RYR2在AngiotensinⅡ誘導(dǎo)的心肌肥大中的作用.pdf

1、背景與目的：
　　長(zhǎng)期血流動(dòng)力學(xué)異常及代謝紊亂均可導(dǎo)致心肌肥厚，包括細(xì)胞體積、膠原含量、基因表達(dá)和電生理等改變，心肌肥厚增加心力衰竭和心臟性猝死的發(fā)生率。鈣相關(guān)的信號(hào)通路如蘭尼堿受體2（Ryanodine receptor2,RYR2）及其調(diào)節(jié)蛋白在心肌肥厚中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。FAT10(The cytokine inducible modifier HLA-F adjacent transcript10,FAT10)是唯一可通過2

2、6S蛋白酶體途徑調(diào)節(jié)底物降解的類泛素蛋白，我們研究發(fā)現(xiàn) FAT10可抑制心肌細(xì)胞凋亡。因此，我們提出假設(shè)：FAT10是否可通過調(diào)控RYR2抑制心肌肥大。本研究探討FAT10調(diào)控RYR2對(duì)血管緊張素II（AngiotensinII,AngII）誘導(dǎo)的心肌肥大的作用。
　　方法：
　　1、用AngII處理原代心肌細(xì)胞48h后，通過western blot分析肥大標(biāo)志物β-肌球蛋白重鏈（myosin, heavy chain7,

3、cardiac muscle, beta, MYH7）和α-輔肌動(dòng)蛋白1（actinin alpha1，ACTN1）的蛋白表達(dá)水平，并通過qRT-PCR分析肥大標(biāo)志物心房利鈉因子（ atrial natriuretic factor， ANF）、B型利鈉肽（ B-type natriuretic peptide,BNP)的 mRNA表達(dá)水平；同時(shí)使用甲基羅丹明(Tetramethylrhodamine, TRITC)-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記技術(shù)和

4、激光共聚焦顯微鏡技術(shù)觀察細(xì)胞表面積變化；
　　2、檢測(cè)FAT10在AngII誘導(dǎo)的肥大心肌細(xì)胞中的蛋白和mRNA表達(dá)水平；
　　3、用FAT10的過表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細(xì)胞，經(jīng)Western blot和qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。然后用過表達(dá)病毒恢復(fù)肥大心肌細(xì)胞中 FAT10的表達(dá)，通過qRT-PCR分析ANF和BNP的mRNA表達(dá)水平，并通過western blot檢測(cè)RYR2的Ser2814位點(diǎn)的磷酸化水平及MYH7的

5、蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、使用AngII處理心肌細(xì)胞后，MYH7和ACTN1的蛋白表達(dá)升高，ANF和BNP的mRNA表達(dá)升高，且細(xì)胞表面積顯著大于對(duì)照組。
　　2、FAT10在 AngII誘導(dǎo)的肥大心肌細(xì)胞中的蛋白和 mRNA表達(dá)水平均降低；。
　　3、使用 FAT10過表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細(xì)胞，F(xiàn)AT10的蛋白和 mRNA表達(dá)上調(diào)。過表達(dá)FAT10后，肥大心肌細(xì)胞中ANF和BNP的mRNA表達(dá)顯著下