1.vegf在心肌肥大中對(duì)脂肪酸代謝的調(diào)節(jié)作用研究;2.vegfb對(duì)心肌肥大誘導(dǎo)作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文1.VEGF在心肌肥大中對(duì)脂肪酸代謝的調(diào)節(jié)作用研究;2.VEGF-B對(duì)心肌肥大誘導(dǎo)作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李清寶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（心臟外科）指導(dǎo)教師：范全心20090315山東人學(xué)博十學(xué)位論文目的：1 ．構(gòu)建心肌肥大模型，培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞和H 9 C 2 細(xì)胞；2 ．探討肥大心肌V E G F 的表達(dá)及其對(duì)P P A R l 3 表達(dá)、脂肪酸代謝水平的影響。方法：1 ．心肌肥大動(dòng)物模型的建立：實(shí)驗(yàn)大鼠隨

2、機(jī)分為假手術(shù)組( n = 8 ) 、手術(shù)組( n _ 8 ) 和藥物組( n - 8 ) 。標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)I 周后，手術(shù)組實(shí)驗(yàn)大鼠異氟烷麻醉后氣管插管，并持續(xù)氣管吸入異氟烷保持麻醉，仰臥位，腹部切口，在腎上水平7 - 0線打結(jié)縮窄腹主動(dòng)脈；假手術(shù)組只是不進(jìn)行腹主動(dòng)脈結(jié)扎，其他于術(shù)操作和于術(shù)組一致；藥物組在手術(shù)組相同手術(shù)操作基礎(chǔ)上自第二天起連續(xù)應(yīng)用V E G F 抑制劑哌加他尼鈉鈉。1 5 d 后收集實(shí)驗(yàn)大鼠心臟備用。2 ．新生鼠心窒肌

3、細(xì)胞的培養(yǎng)：1 ．3 d 大鼠幼鼠麻醉，無(wú)菌條件下開胸取出心臟，0 ．0 8 ％胰蛋白酶液消化，用1 0 ％胎牛血清D M E M 培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，置于3 7 0 C含5 ％C 0 2 培養(yǎng)箱中，根據(jù)心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞貼壁時(shí)間的不同采用差速貼壁培養(yǎng)。細(xì)胞隨機(jī)分為三組：對(duì)照組( n = 1 0 ) 、P E 組( n = 1 0 ) 和實(shí)驗(yàn)組( n = 1 0 ) ，P E●組在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加苯腎上腺素( P E ，p h e n

4、 y l e p h r i n e ) 培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加P E 和哌加他尼鈉鈉培養(yǎng)，之后進(jìn)行下一步處理：1 ．細(xì)胞更換培養(yǎng)液，對(duì)照組培養(yǎng)液含【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h ；P E 組培養(yǎng)液含P E 和【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h ；實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液含P E 、哌加他尼鈉鈉和【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h 。之后用P B S清洗細(xì)胞，1 0 ％三氯乙酸處理細(xì)胞，沉淀蛋白，用氫氧化鈉溶解蛋白沉淀，閃爍計(jì)數(shù)器

5、讀數(shù)測(cè)量。2 ．細(xì)胞更換培養(yǎng)液，對(duì)照組培養(yǎng)液含9 ，1 0 ．【3 H 】棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ；P E 組培養(yǎng)液含P E 、9 ，1 0 - 【3 H I 棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ；實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液含P E 、哌加他尼鈉鈉、9 ，1 0 ．[ 3 H I 棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ，之后收集測(cè)量。3 ．H 9 C 2 細(xì)胞的培養(yǎng)：H 9 C 2 細(xì)胞按5 0 0 0 ／c m 2 密度接種到培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基為1 0 ％胎牛血清D M E M

6、 培養(yǎng)液，每2 天換液一次。細(xì)胞隨機(jī)分為二組：對(duì)照組( n = 1 0 ) 、L P S 組( n = 1 0 ) 和實(shí)驗(yàn)組( n _ 1 0 ) ，L P S 組在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加L P S 培養(yǎng)2 4 h ；實(shí)驗(yàn)組在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加L P S 和哌加他尼鈉鈉培養(yǎng)2 4 h ，對(duì)照組正常換液。4 ．R T ．P C R 法檢測(cè)：分別從左室組織提取R N A ，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到c D N A ，以A P R T 作為參照，通過R T ．