水甘油通道蛋白9在非酒精性脂肪肝中作用的研究.pdf

1、目的:水甘油通道蛋9（aquaglyceroporin-9，AQP9）作為細(xì)胞膜上的甘油轉(zhuǎn)運(yùn)通道已被廣泛認(rèn)識(shí)，但對(duì)其在非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）發(fā)生發(fā)展過程中所發(fā)揮的作用所知甚少。我們利用慢病毒(lentivirus)相關(guān)RNA干擾技術(shù)，通過下調(diào)高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD大鼠模型肝AQP9的表達(dá)，抑制肝臟對(duì)甘油的吸收作用，探索AQP9在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中所產(chǎn)生的生

2、理效應(yīng)。
　　方法:將6-7周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:正常組、高脂組、對(duì)照組和轉(zhuǎn)染組，每組5只。其中，正常組大鼠用普通飲食喂養(yǎng)8周，高脂組、對(duì)照組及轉(zhuǎn)染組大鼠用高脂飲食喂養(yǎng)8周。后3組大鼠在高脂飲食喂養(yǎng)前一天，通過肝門靜脈注射轉(zhuǎn)染方式，分別予以等量的PBS溶液、lentivirus-scramble及l(fā)entivirus-shRNA-AQP9。8周后處死全部大鼠，運(yùn)用蛋白免疫印跡(Western blot)、組織免疫組化及實(shí)時(shí)

3、熒光定量PCR(Real time-PCR, RT-PCR)技術(shù)，檢測(cè)各組大鼠AQP9蛋白和mRNA在肝臟中的表達(dá)情況;通過肝組織切片HE染色和油紅O染色，以及測(cè)定肝組織內(nèi)甘油和甘油三酯(Triglycercide，TG)含量，檢測(cè)各組大鼠肝細(xì)胞中脂質(zhì)沉積情況。
　　結(jié)果:Western blot及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與高脂組及對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染組大鼠肝臟AQP9蛋白及mRNA表達(dá)量明顯減少;組織免疫組化結(jié)果提示，轉(zhuǎn)染組大鼠肝

4、實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜上AQP9蛋白的表達(dá)較高脂組及對(duì)照組明顯下降;肝組織切片HE染色及油紅O染色結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)TG沉積量與高脂組及對(duì)照組相比，均顯著減少;試劑盒測(cè)定各組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油及TG含量，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染組明顯低于高脂組及對(duì)照組。
　　結(jié)論:重組慢病毒lentivirus-shRNA-AQP9轉(zhuǎn)染大鼠后，成功下調(diào)肝細(xì)胞AQP9蛋白及mRNA的表達(dá)水平。抑制AQP9表達(dá)，能夠減少肝細(xì)胞對(duì)甘油的轉(zhuǎn)運(yùn)，并減輕高脂飲食誘導(dǎo)NAFL