大鼠部分輸尿管梗阻解除梗阻前后腎臟病理改變時(shí)相研究.pdf

1、目的：
　　 梗阻性腎病(obstructive nephropathy,ON)是嬰兒和兒童腎臟衰竭最常見(jiàn)的原因。兒童梗阻性腎病占所有兒童終末期腎臟疾病(end-stage renal disease ESRD)的0.3%,占所有兒童腎移植的16.1%。在人類梗阻性腎病中,多數(shù)為不完全性梗阻。
　　 梗阻性腎病造成腎臟細(xì)胞水平的改變主要分為三個(gè)廣義范疇:間質(zhì)炎癥,腎小管凋亡和間質(zhì)纖維化,三者之間相互交叉影響,最終導(dǎo)致腎小

2、管萎縮、間質(zhì)纖維化和腎單位喪失,因此,為了最大限度的減輕腎臟損害,應(yīng)該在腎臟發(fā)生不可逆損傷之前解除梗阻。國(guó)外已經(jīng)有學(xué)者制作了輸尿管部分梗阻的動(dòng)物模型,在輸尿管梗阻后不同時(shí)間點(diǎn)解除梗阻,研究表明腎臟受損傷的程度和梗阻持續(xù)時(shí)間及梗阻的嚴(yán)重程度成正比,及時(shí)解除梗阻后腎小管萎縮、腎間質(zhì)纖維化等病理改變可以部分逆轉(zhuǎn),可以減少腎單位的丟失。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)已經(jīng)制作成功的具有高度重復(fù)性和一致性的輸尿管部分梗阻動(dòng)物模型,研究輸尿管部分梗阻后不

3、同時(shí)間點(diǎn)腎臟病理改變規(guī)律及發(fā)生的時(shí)空特點(diǎn),并在不同時(shí)間點(diǎn)解除梗阻,探討腎臟發(fā)生不可逆損傷的確切病理時(shí)相,為進(jìn)一步篩選診斷腎臟不可逆損傷標(biāo)志物奠定基礎(chǔ),為梗阻性腎病以及其它慢性腎臟疾病腎損傷選擇最佳治療時(shí)機(jī)具有重要的意義。
　　 材料與方法：
　　 選擇2月齡SD大鼠144只,隨機(jī)分為部分輸尿管梗阻組(PUUO組)和對(duì)照組(Sham組),PUUO組又以術(shù)后1天、3天、5天、7天、14天分為五組,PUUO組術(shù)后1天、3天、5

4、天組再以解除梗阻后0、1、3、5、7天各分為五組。每組8只SD大鼠。PUUO組在無(wú)菌條件下,經(jīng)腹切口行左側(cè)輸尿管部分結(jié)扎術(shù),Sham組為正常腎臟。取患側(cè)腎臟,測(cè)量大體標(biāo)本,多聚甲醛固定,石蠟包埋行HE染色、膠原纖維染色及免疫組化染色觀察腎臟的病理改變。
　　 結(jié)果：
　　 一、輸尿管部分梗阻后病理改變
　　 1、大體病理改變
　　 Sham組:腎臟未見(jiàn)異常。PUUO組:梗阻后1天出現(xiàn)腎盂擴(kuò)張,3天腎臟增大

5、,腎實(shí)質(zhì)變薄,腎盞乳頭受壓,穹窿部乳頭變平鈍,部分成凹形,隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng),乳頭萎縮逐漸加重,腎盂擴(kuò)張程度逐漸加重,腎皮質(zhì)逐漸變薄。
　　 2、HE染色結(jié)果
　　 Sham組:腎臟未見(jiàn)病理改變。PUUO組:隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng),腎小管損害進(jìn)行性加重。PUUO術(shù)后1天上皮細(xì)胞水腫,偶見(jiàn)小管擴(kuò)張,3天出現(xiàn)部分腎小管輕度擴(kuò)張,5天可見(jiàn)腎小管擴(kuò)張明顯,7天腎小管擴(kuò)張更加明顯,上皮細(xì)胞萎縮。14天大部分腎小管明顯擴(kuò)張,上皮細(xì)胞萎縮。

6、>　　 3、膠原纖維染色結(jié)果
　　 Sham組:腎臟未見(jiàn)膠原纖維沉積。PUUO組:梗阻1天腎臟可見(jiàn)少量膠原纖維沉積,隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng),膠原纖維沉積逐漸增加。
　　 4、免疫組化結(jié)果
　　 Sham組:未見(jiàn)ED-1及TGF-β1表達(dá),血管周圍可見(jiàn)α-SMA表達(dá),其余部位未見(jiàn)α-SMA表達(dá),可見(jiàn)E-cadherin大量表達(dá)。
　　 PUUO組:梗阻后1天、3天、5天、7天腎小球及腎小管周圍ED1表達(dá)逐漸增

7、加,14天ED1表達(dá)減少。梗阻后1天、3天、5天腎小球內(nèi)可見(jiàn)ED1表達(dá),梗阻后7天偶見(jiàn)腎小球內(nèi)ED1表達(dá)、14天腎小球內(nèi)未見(jiàn)ED1表達(dá),組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng),α-SMA及TGF-β1表達(dá)逐漸增加,E-cadherin表達(dá)逐漸減少,組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 二、輸尿管部分梗阻解除之后病理改變
　　 1、HE染色結(jié)果
　　 PUUO術(shù)后1天解

8、除梗阻,上皮細(xì)胞水腫逐漸消失,小管擴(kuò)張減輕。PUUO術(shù)后3天、5天解除梗阻,腎小管仍逐漸擴(kuò)張,上皮細(xì)胞萎縮。
　　 2、膠原纖維染色結(jié)果
　　 PUUO術(shù)后1天解除梗阻,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),膠原纖維沉積逐漸減少,PUUO術(shù)后3天、5天解除梗阻,膠原纖維表達(dá)仍然逐漸增加。
　　 3、免疫組化
　　 PUUO術(shù)后1天解除梗阻,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),α-SMA及TGF-β1表達(dá)逐漸下降,E-cadherin表達(dá)逐漸增加,

9、至解除梗阻后第7天α-SMA呈陰性表達(dá),TGF-β1僅有少量表達(dá),E-cadherin表達(dá)進(jìn)行性增加。PUUO術(shù)后3天、5天解除梗阻,α-SMA及TGF-β1表達(dá)仍然持續(xù)增加,E-cadherin表達(dá)進(jìn)行性減少。組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、PUUO組大鼠,梗阻后24小時(shí)腎臟即發(fā)生病理改變,隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng),病理改變逐漸加重,腎小管上皮逐漸擴(kuò)張、萎縮,可見(jiàn)腎間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸增加,