大鼠缺血預(yù)處理、心肌缺血及再灌注誘發(fā)凋亡與脊髓nNOS、NMDAR-,1-含量的關(guān)系.pdf

1、[目的]: 目前的研究發(fā)現(xiàn)，心肌缺血及再灌注可誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡，缺血預(yù)處理對(duì)心肌缺血及再灌注誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡具有對(duì)抗作用，但其機(jī)制尚未完全闡明。NO能促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，nNOS、NMDAR<,1>與NO的生成有關(guān)。 本研究觀察大鼠心肌缺血時(shí)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與脊髓中nNOS、NMDAR<,1>表達(dá)的陽(yáng)性率，以探討心肌缺血誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡與脊髓中nNOS、NMDAR<,1>含量的關(guān)系；觀察大鼠MIR時(shí)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與脊髓

2、中nNOS、NMDAR<,1>表達(dá)的陽(yáng)性率，以探討MIR誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡與脊髓中nNOS、NMDAR<,1>含量的關(guān)系；大鼠在MIR前實(shí)施IPC，觀察心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與脊髓中nNOS、NMDAR<,1>表達(dá)的陽(yáng)性率，以探討IPC抗MIR誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡與大鼠脊髓中nNOS、NMDAR<,1>含量的關(guān)系。 [方法]: 將入選的100只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(C)、缺血Ⅰ組(Ⅰ/I)、缺血Ⅱ組(Ⅱ/I)、缺血Ⅲ組(Ⅲ

3、/I)、缺血再灌注Ⅰ組(Ⅰ/IR)、缺血再灌注Ⅱ組(Ⅱ/IR)、缺血再灌注Ⅲ組(Ⅲ/IR)、缺血再灌注Ⅳ組(Ⅳ/IR)、缺血預(yù)處理Ⅰ組(Ⅰ/IPC)和缺血預(yù)處理Ⅱ組(Ⅱ/IPC)共10組，每組10只。C組只在冠狀動(dòng)脈左前降支埋線持續(xù)2 h。Ⅰ/I，Ⅱ/I和Ⅲ/I組分別結(jié)扎左前降支1 h，2 h和3 h。Ⅰ/IR，Ⅱ/IR，Ⅲ/IR和Ⅳ/IR組都先結(jié)扎左前降支2 h，然后分別松扎0.5h，1.5h，3h和4 h。Ⅰ/IPC和Ⅱ/IPC組都

4、先用止血帶結(jié)扎雙下肢以阻斷血流5 min，然后松開(kāi)止血帶5 min，如此重復(fù)4次，結(jié)扎左前降支2 h后松扎，最后，這兩組分別再灌注0.5 h和3 h。在大鼠模型的制備過(guò)程中，觀察心肌顏色及描記心電圖肢體Ⅱ?qū)?lián)。模型制備成功后，以TUNEL方法測(cè)定各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡水平，以免疫組化方法測(cè)定各組大鼠脊髓中nNOS與NMDAR<,1>的表達(dá)，并計(jì)算各組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)和脊髓中nNOS、NMDAR<,1>的陽(yáng)性率。 [結(jié)果]:

5、 結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支期間，大鼠心尖部由紅色變成紫褐色，肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖顯示ST段明顯抬高，T 波高聳。在大鼠左前降支松扎期間，造成心肌血流再灌注，心尖部迅速由紫褐色恢復(fù)紅色，心電圖的肢體Ⅱ?qū)?lián)顯示ST段回落，T 波逐漸恢復(fù)，并出現(xiàn)室性期前收縮或室性心動(dòng)過(guò)速等心律失常。在顯微鏡下觀察切片，正常心肌細(xì)胞的細(xì)胞核呈藍(lán)色，凋亡心肌細(xì)胞的細(xì)胞核被染成深淺不一的棕褐色；脊髓表達(dá)nNOS 與 NMDAR<,1>陽(yáng)性的細(xì)胞表現(xiàn)為：脊髓神經(jīng)元

6、被染成黃色或棕黃色，這些陽(yáng)性細(xì)胞集中在脊髓灰質(zhì)的神經(jīng)元細(xì)胞。 與C組比較，Ⅰ/I、Ⅱ/I、Ⅲ/I、Ⅰ/IR、Ⅱ/IR、Ⅲ/IR、Ⅳ/IR、Ⅰ/IPC 和Ⅱ/IPC組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓中：nNOS 與 NMDAR<,1> 的陽(yáng)性率均升高(P<0.05)。分別與Ⅰ/I、Ⅱ/I、Ⅲ/I 組比較，Ⅰ/IR、Ⅱ/IR、Ⅲ/IR 和Ⅳ/IR 組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓中 nNOS 與 NMDAR<,1>的陽(yáng)性率均升高(P<0.

7、05)。與Ⅰ/IR組比較，Ⅰ/IPC 組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓中nNOS與NMDAR<,1>的陽(yáng)性率均降低(P<0.05)。與Ⅲ/IR 組比較，Ⅱ/IPC 組大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓中 nNOS與NMDAR<,1>的陽(yáng)性率均降低(P<0.05)。各組間心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、脊髓中nNOS 與 NMDAR<,1>的陽(yáng)性率大小比較的結(jié)果均為：Ⅲ/IR 組>Ⅳ/IR組>Ⅱ/IR組>Ⅱ/IPC 組>Ⅰ/IR組>Ⅰ/IPC 組>Ⅱ/I組>Ⅲ

8、/I組>Ⅰ/I組>C組。 各組脊髓中nNOS與NMDAR<,1>的陽(yáng)性率間成正相關(guān)(P<0.01)，r=0.97。 [結(jié)論]: 1．在大鼠心肌缺血1 h～3 h期間，心肌細(xì)胞凋亡和脊髓中nNOS、NMDAR<,1>含量的高峰發(fā)生在大鼠心肌缺血2 h。 2．在MIR0.5 h～4 h期間，心肌細(xì)胞凋亡和脊髓中nNOS、NMDAR<,1>含量的高峰發(fā)生在MIR3h。在MIR0.5 h～3 h期問(wèn)，心肌細(xì)胞凋亡