USPIO標(biāo)記小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞體外初步研究.pdf

1、目的：利用超小超順磁性氧化鐵(USPIO)核磁共振對(duì)比劑體外標(biāo)記調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,檢測(cè)USPIO對(duì)比劑對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生物學(xué)影響,從而為核磁共振成像(MRI)在器官移植受者中監(jiān)測(cè)回輸體內(nèi)的USPIO標(biāo)記的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分布等提供依據(jù)。
　　方法：采用調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)分選試劑盒分離純化小鼠自然Treg。將分離出的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞與濃度分別為0.01、0.05、0.10、0.15mg/ml的二巰

2、基琥珀酸(DMSA)包被的USPIO共孵育3h,6h,12h,24h,采用普魯士藍(lán)染色和原子吸收分光光度計(jì)法檢測(cè)USPIO的淋巴細(xì)胞攝取率,并用采用噻唑藍(lán)(MTT)活細(xì)胞染色方法檢測(cè)標(biāo)記后的淋巴細(xì)胞的活性。篩選出合適的USPIO濃度,以該濃度的USPIO標(biāo)記分離純化的Treg。流式細(xì)胞儀檢測(cè)(FCM)USPIO標(biāo)記前后的Treg內(nèi)Foxp3的表達(dá)狀況。通過(guò)對(duì)Treg對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用的檢測(cè)來(lái)判斷Treg的功能變化。MRI掃描用瓊脂

3、凝膠固定的USPIO標(biāo)記的細(xì)胞懸液,了解標(biāo)記前后的細(xì)胞信號(hào)變化情況。
　　結(jié)果：Treg能夠攝取USPIO,USPIO的攝取量隨USPIO的濃度改變而變化,USPIO的濃度越大Treg攝取的量越大,反之亦然;USPIO在一定濃度范圍內(nèi),對(duì)Treg生物學(xué)特性如細(xì)胞活性、細(xì)胞表型等無(wú)明顯影響,仍能使Treg維持一定的免疫調(diào)節(jié)功能。MRI掃描圖像顯示USPIO標(biāo)記的TregT2加權(quán)相信號(hào)明顯降低。
　　結(jié)論：DMSA包被的USPI