血清肝細胞生長因子在大腸癌肝轉移患者中的臨床價值.pdf

1、大腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，每年全世界約有50萬人發(fā)病，在西方國家大腸癌死亡率僅次于肺癌和乳腺瘤，居惡性腫瘤死亡率第3位。近年來我國大腸癌發(fā)病率及死亡率亦呈升高趨勢，據(jù)1993～1997年中國1/10人口死因抽樣調(diào)查結果[2]顯示，中國大腸癌居惡性腫瘤死因第五位。在臨床就診的大腸癌病人，其中約1/3病人在就診時腫瘤已至晚期不能切除或有彌漫性轉移，這類病人預后很差，平均生存期約7個月。而另外2/3的病人即使對原發(fā)腫瘤能行“根治性切除

2、”，但仍約50%的病人生存期不超過5年，其中大部分（約占40%）患者死于肝轉移。如何早期預測大腸癌的轉移，一直是醫(yī)學界十分關注的問題。 肝細胞生長因子（hepatocytegrowthfactor，HGF）是一種多功能的細胞因子，有研究表明，HGF能調(diào)節(jié)細胞生長和運動，促進多種細胞組織形態(tài)的發(fā)生，是上皮細胞和間質(zhì)細胞相互作用的體液介質(zhì)，具有強大的促分裂、組織形成、誘導上皮遷移、侵襲以及誘發(fā)血管生成的作用。在腫瘤細胞中HGF和c-

3、met結合導致受體自身磷酸化，增強了酪氨酸激酶的活性，導致多種底物蛋白的酪氨酸磷酸化。由于腫瘤組織中HGF和c-met的同時高表達，形成正反饋，導致腫瘤的無限生長和侵襲行為。而這種正反饋作用已經(jīng)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤等惡性腫瘤中得到證實，并顯示HGF在惡性腫瘤體液中顯著升高，并與侵襲狀態(tài)密切相關。 國內(nèi)外雖已有許多學者就HGF在各類惡性腫瘤方面進行了研究，但大多僅限于組織中的研究。如國內(nèi)謝倩、羅運權等通過檢測

4、肝癌組織中HGF及其受體的表達，認為HGF與肝癌的轉移有密切關系。EichbaumMH等報道了原發(fā)乳腺癌組織中HGF濃度是一個獨立的預后指標。 近幾年來對于血清中HGF含量的研究也越來越多，Tanaka等的研究表明，早期胃癌和進展期胃癌患者的血清HGF顯著高于正常對照組，提示在早期胃癌和進展期胃癌中，血清HGF水平可能是一個有臨床價值的腫瘤標志物。國內(nèi)尹家俊等也報道了乳腺癌術后轉移組的血清HGF濃度顯著高于無復發(fā)轉移組及對照組。

5、國外雖已有學者針對血清中HGF水平與大腸癌分期的關系進行了研究，但就大腸癌肝轉移方面的研究仍局限在組織中，特別是在血清中的表達情況的研究仍是甚少。 目的：鑒于目前診斷大腸癌是否有肝轉移的存在，大多是依靠影像學如B超、CT或MR，以及術后或治療后血清CEA是否升高等來確定。而臨床上，當影像學已有診斷時，病情往往已進入晚期，給臨床治療已帶來了一定的困難，而且患者的預后也已較差。所以，目前臨床上通常采取大腸癌術后肝臟介入化療來預防肝轉

6、移的可能性。因此，如何能早期預測大腸癌是否具有發(fā)生肝轉移的可能性，對提高大腸癌預后的預測和指導更有效的治療方法都有著重要的意義。 本研究以52例大腸癌患者為研究對象，應用雙抗體夾心法ELISA對大腸癌患者血清中肝細胞生長因子的測定，來分析其與大腸癌發(fā)生肝轉移的關系，試圖探討HGF對判斷肝轉移的價值。 方法：自2004年6月至2006年12月選擇病例52例，均為大腸癌患者，且所有患者均經(jīng)過病理證實，其中男、女之比為27：2

7、5，年齡31～75歲，平均年齡54.17歲。在52例患者中，根據(jù)Duke's分期，分為A和B期13例、C期17例、D期22例，此D期的22例中，17例合并有肝轉移（均有影像學診斷），5例為其他部位轉移（無肝臟轉移）。另設健康對照20例（均來自于我院體檢科健康體檢人群），年齡25歲～72歲，平均40.3歲，男女之比為13：7。 取受檢患者新鮮血10ml，立即于4℃300rmin離心15min，取上清液1ml分裝后置-70℃深低溫冰

8、箱凍存?zhèn)溆弥翜y定。 實驗方法按照購自廣州康潤公司的人HGF檢測試劑盒（美國RD公司產(chǎn)品，標號：063402）上說明書的操作步驟進行檢測。具體測定步驟為：（1）取樣品室溫解凍；（2）雙蒸水稀釋洗滌液至500ml校準稀釋液倍比稀釋HGF標準品濃度至8000μg/L；（3）分別加入5μl標準品（Standards）、5μl已稀釋血清或血漿于反應板孔中，輕輕混勻10s；（4）每孔加入200μlBiotinantiHGF，輕輕混勻30s，

9、37℃溫育30min；（5）洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干），這樣反復洗滌5次；（6）每孔加入200μlHRP，輕輕混勻10s，37℃溫育30min；（7）洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干），這樣反復洗滌5次；（8）每孔加入100μlTMB顯色液，輕輕混勻10s，置暗處室溫溫育20min；（9）每孔加入100μl終止液（StopSolution），輕輕混勻30

10、s；15min內(nèi)在酶標儀中以450nm處讀光密度值，再根據(jù)標準曲線計算出各樣本HGF含量。我們將所有數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0軟件包進行處理，采用獨立樣本t檢驗和One-WayANOVA檢驗，其中P<0.05認為具有統(tǒng)計學上顯著差異。 結果： 一、血清HGF值在實驗組和對照組之間的比較。 所有研究對象在入選時均確診為大腸癌，并均有病理證實。同時選擇20例健康體檢者作為對照組進行檢測。并且將檢測結果分別輸入SPSS1

11、3.0軟件包內(nèi)進行計算和分析。通過檢查發(fā)現(xiàn)，大腸癌患者血清中HGF的含量普遍較高，實驗組與健康對照組之間存在著顯著的差異（P<0.005），說明大腸癌患者的血清中HGF的含量遠高于健康人群。 一、有肝轉移和無肝轉移兩組之間的比較。 將所有研究對象，通過各項檢查，包括BUS、CT等檢查，區(qū)分為有肝轉移和無肝轉移兩組，并分別把數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，通過分析發(fā)現(xiàn)，有肝轉移組其HGF的含量要遠高于無肝轉移組患者（P<0.005）。

12、從檢驗中我們還發(fā)現(xiàn)，除了有肝轉移的患者血清中HGF含量較高外，其他部位轉移的大腸癌患者，其血清中HGF的含量也遠高于無轉移組的患者。說明除了肝臟在受到損害時，自身會釋放肝細胞生長因子外，原發(fā)腫瘤本身在瘤細胞脫落時，也可以分泌該因子。 三、血清中HGF的含量與大腸癌分期的關系。 正如與有、無肝轉移分組一樣，我們將患者按照Duck分期方法，將患者分成Ⅵ個期別，從實驗的結果也可以發(fā)現(xiàn)，血清中HGF的含量與大腸癌的分期也有著密切

13、的關系，而且分期越晚，血清中HGF的含量就越高（P<0.005）。由此可以看出，大腸癌患者血清中HGF的含量，不僅可以作為大腸癌的一個標志物，更可以作為預測大腸癌有無肝轉移的一個指標。 結論：通過本實驗研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌患者與對照組之間相比，HGF值的升高有著顯著的差異性，說明了HGF與大腸癌確實有著密切的關系。另外，從本實驗結果還發(fā)現(xiàn)，HGF與大腸癌的分期也有著密切的關系，而且分期越晚，其血清HGF值就越高，特別是有肝轉移的患者

14、，其HGF血清中的表達也遠遠高于無肝轉移組，從而進一步的提示了血清HGF在大腸癌中可能預示了一種更具有侵襲性的生物學行為。然而值得一提的是，在Duck'D的患者中，其中有5例只有其他部位轉移，而不存在肝臟轉移，雖然其血清HGF值較高，但與Duck'A、B相比較，卻無明顯差異性，分析其原因，可能與例數(shù)較少有關?？傊逯蠬GF值的測定，有可能不僅只成為應用于大腸癌患者診斷的一項腫瘤標記物，更可能可以作為預測大腸癌有無肝轉移的一個指標，對