基于高密度單核苷酸多態(tài)性微陣列的胚胎植入前全面遺傳檢測(cè).pdf

1、目前鑒于不孕不育人群的增加，輔助生殖技術(shù)，包括體外受精和胞漿內(nèi)精子注射技術(shù)的臨床操作逐漸增加。但與自然生產(chǎn)相比，這些技術(shù)由于鑒別異常胚胎缺陷的能力有限，以及植入多胚胎以確保受孕率等操作的使用，會(huì)增加胎兒出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)，影響嬰兒的出生率。胚胎植入前遺傳診斷是在常規(guī)體外受精將胚胎植入母體之前，通過一系列的遺傳檢測(cè)獲得胚胎的遺傳信息，發(fā)現(xiàn)遺傳缺陷，確保植入更少但質(zhì)量更優(yōu)的胚胎。
　　現(xiàn)在胚胎植入前遺傳檢測(cè)普遍采用的遺傳檢測(cè)方法包括PCR

2、和熒光原位雜交，用以檢測(cè)單基因突變，以及有限分辨率的染色體異常。本研究旨在建立一種能全面分析胚胎遺傳信息的遺傳檢測(cè)方法，采用的是含有約300,000檢測(cè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性微陣列的方法。高密度芯片的位點(diǎn)覆蓋全基因的23對(duì)染色體，對(duì)于染色體片段的平均分辨長(zhǎng)度約10.6 kb，因此可在一次檢測(cè)中探測(cè)到從整條染色體到染色體微小片段的缺失、增加、插入、非平衡易位和染色體數(shù)目異常等。
　　本研究的第一步是要建立多重置換單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增方法

3、，將胚胎植入前活體取樣的單個(gè)細(xì)胞基因組擴(kuò)增到單核苷酸多態(tài)性微陣列可以檢測(cè)的量。經(jīng)過產(chǎn)物濃度檢測(cè)、瓊脂糖凝膠電泳和384位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性微陣列驗(yàn)證，擴(kuò)增平均產(chǎn)量為2.70μg，產(chǎn)物片段長(zhǎng)度大于2 kb，全基因組覆蓋率近99％，在數(shù)量和質(zhì)量上均完全符合下游遺傳檢測(cè)的要求
　　第二步采用12個(gè)DNA樣品，建立并驗(yàn)證了用以檢測(cè)細(xì)胞染色體異常的單核苷酸多態(tài)性微陣列高密度芯片方法。12個(gè)DNA樣品包括人類染色體異常細(xì)胞系的標(biāo)準(zhǔn)gDNA樣品，