BCRP和TOPOII在裸鼠A549-CDDP多藥耐藥移植瘤模型中的表達和意義.pdf

1、目的：通過培養(yǎng)體外人非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)A549 多藥耐藥細胞系，建立裸鼠A549/順鉑(CDDP)耐藥移植腫瘤模型，檢測移植瘤細胞乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白（BCRP）及拓?fù)洚悩?gòu)酶II（TOPOⅡ）基因和蛋白的表達，并探討其在腫瘤多藥耐藥方面的意義。
　　 方法：以CDDP 為誘導(dǎo)，通過大劑量間歇誘導(dǎo)法和逐步增加劑量法，得到多藥耐藥細胞系A(chǔ)549/CDDP。于裸鼠左側(cè)頸部皮下

2、分別接種A549細胞系和A549/CDDP耐藥細胞系各3×105個/0.3ml 建立移植腫瘤模型。觀察腫瘤生長特性，瘤體原代培養(yǎng)后，用四甲基偶氮唑蘭（MTT）法分別檢測該移植瘤細胞對依托泊苷，阿霉素，諾維本，順鉑及5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐藥性，并計算出耐藥指數(shù)（resistanceindex，RI)，通過RT-PCR法以及Western-blot 法分別檢測乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)，以及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPO Ⅱ)的mRNA

3、和蛋白的表達。
　　 結(jié)果：①至處死裸鼠之前，A549組和A549/CDDP組中裸鼠均無死亡。在同一時間，A549組腫瘤生長速度較A549/CDDP組生長速度快。A549組瘤體重量（2.23±0.34g)和A549/CDDP組瘤體重量（2.15±0.27)g 無明顯差異(P＞0.05）。②在顯微光鏡觀察下原代培養(yǎng)A549組及A549/CDDP組移植瘤細胞均為貼壁生長，A549組移植瘤細胞為梭形，柳葉狀。而A549/CDDP組移植

4、瘤細胞較小，為不規(guī)則形態(tài)。③A549/CDDP組移植瘤細胞對順鉑的50％的抑制濃度為A549組的17.3倍，對依托泊苷，阿霉素，諾維本，5-FU的耐藥性也明顯高于A549組移植瘤細胞。耐藥指數(shù)分別為5.1，5.4，2.7，16.5。④RT-PCR結(jié)果顯示，BCRP和TOPOⅡ在兩組移植瘤細胞中均有表達，BCRP在A549/CDDP組中的表達量較高；而TOPOII在A549組中的表達量較高，兩者相比差異均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）⑤W