牛分枝桿菌Mb1761c和Mb2277基因表達產(chǎn)物免疫原性及其在ELISA方法中的初步應用的研究.pdf

1、牛結核病主要是由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis，MTB) 引起的一種人獸共患傳染病，它嚴重危害人的健康和畜牧業(yè)的發(fā)展，且導致巨大的經(jīng)濟損失。因此，對牛結核病的防控顯得格外的重要。然而，缺乏可用于檢測結核桿菌的特應性靶標分子及用于研制有效疫苗的候選分子是結核病防治面臨的棘手問題，因此，發(fā)掘這些重要分子就成了結核病防治研究的熱點。分泌蛋白是目前研究較多的結核桿菌特異性抗原，本實驗篩選出Mb1761c和Mb2277兩個分泌

2、蛋白，在利用生物信息學方法對其信號肽和疏水跨膜區(qū)進行分析的基礎上，通過實驗生物學方法，對其表達免疫原性進行了驗證。本研究主要分為以下兩個方面的內容： （1）牛分枝桿菌Mb1761c和Mb2277蛋白的免疫原性的初步研究。根據(jù)GenBank提供的Mb1761c和Mb2277的基因序列設計引物，通過PCR方法擴增出目的基因，構建重組表達質粒，原核誘導表達后，利用Western-Blot對表達產(chǎn)物的免疫原性進行驗證。結果表明目的蛋白具

3、有較強的免疫原性，從而為進一步研究其亞單位疫苗及ELISA檢測方法提供了候選蛋白。 （2）重組蛋白在ELISA檢測方法中的初步應用研究。將篩選得到的兩個具有較強免疫原性的蛋白分子Mb1761c和Mb2277作為抗原，分別進行ELISA實驗。結果表明Mb2277的靈敏性較強。將兩個蛋白按照不同比例混合作為包被抗原，結果顯示將兩種重組蛋白按1：1混合包被，ELISA的靈敏度高于單個抗原包被的。 本研究篩選鑒定了分枝桿菌兩個具