貴州本地高羊茅組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、高羊茅是禾本科羊茅屬多年生草本植物，具有耐踐踏、易再生、適應(yīng)性強(qiáng)、壽命長等特點(diǎn)，原產(chǎn)西歐、北非，現(xiàn)廣泛分布于世界各地，已廣泛應(yīng)用于我國多個(gè)省市，包括江西、江蘇、四川、貴州、北京等。高羊茅草質(zhì)好、營養(yǎng)豐富，青飼、曬制干草均可，是與豆科牧草混播建植放牧草地的優(yōu)良草種。但目前高羊茅草種的需求仍基本依賴于進(jìn)口，在一定程度上極大限制我國草業(yè)的快速發(fā)展。黔草1號(hào)和黔草2號(hào)均是利用貴州野生高羊茅作親本材料歷經(jīng)數(shù)年定向培育而成的貴州本地品種，與傳統(tǒng)育種

2、技術(shù)相比，運(yùn)用生物技術(shù)改良草種品種并培育出新品種已日益受重視。本研究以黔草1號(hào)和黔草2號(hào)的種子為外植體，通過研究不同影響因素（包括種子的預(yù)處理方式、基本培養(yǎng)基、品種和激素）對(duì)愈傷組織形成和分化的影響，建立貴州本地高羊茅品種的組織培養(yǎng)和植株再生體系，為利用基因工程技術(shù)培育出更適應(yīng)貴州地區(qū)且生長狀態(tài)表現(xiàn)更加優(yōu)異的高羊茅新品種打下基礎(chǔ)。
　　1.對(duì)高羊茅種子的預(yù)處理結(jié)果顯示，0.1％HgCl2處理0s和15s時(shí)的發(fā)芽率最高，且各品種的發(fā)

3、芽率有橫向切割發(fā)芽率＞縱向切割發(fā)芽率＞未切割發(fā)芽率；處理時(shí)間超過30s后的發(fā)芽率急速下降，處理時(shí)間分別為45s和60s各品種的發(fā)芽率有縱向切割發(fā)芽率＜橫向切割發(fā)芽＜未切割發(fā)芽率。未經(jīng)過0.1％HgCl2處理的種子的愈傷組織后期污染情況嚴(yán)重。
　　2.貴州本地品種的高羊茅成熟種子的愈傷組織誘導(dǎo)和分化的結(jié)果表明，MS培養(yǎng)基是最適宜采用的基本培養(yǎng)基，兩個(gè)本地品種的誘導(dǎo)率分別達(dá)到76.3％和75.6％；2，4-D對(duì)高羊茅的愈傷組織有明顯的

4、促進(jìn)作用，6-BA則有明顯的抑制作用，在2，4-D濃度＜7mg/L時(shí)，隨著濃度的增加誘導(dǎo)率增加，在濃度為7mg/L時(shí)的誘導(dǎo)率達(dá)到最大值，兩個(gè)本地品種的誘導(dǎo)率分別達(dá)到74.9％和72.3％，濃度超過7mg/L時(shí)，隨著濃度的增加誘導(dǎo)率下降，6-BA濃度為2mg/L時(shí)愈傷組織的分化情況最好，兩個(gè)本地品種的分化率分別達(dá)到42.5％和37.5％。
　　3.影響貴州本地高羊茅品種的農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化的因素分析表明：轉(zhuǎn)化前的最佳預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為4天，兩