抗上皮細胞生長抑制因子對膀胱癌細胞中c-jun與HB-EGF的影響.pdf

1、目的：
　　 抗上皮細胞生長抑制因子(Antiproliferative Factor,APF)是一種由9個氨基酸與半乳糖相連的小分子量、熱穩(wěn)定的唾液酸糖多肽,它含有Frizzled 8的跨膜片段,主要存在于間質(zhì)性膀胱炎患者的尿液中,具有強烈的抗膀胱上皮細胞生長的作用,同時發(fā)現(xiàn)其具有抗膀胱腫瘤細胞生長的作用,尤其對T-24細胞(膀胱癌細胞)。AP-1在腫瘤形成及發(fā)展過程中,通過促進細胞增殖、抑制分化、促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等過

2、程發(fā)揮作用。APF作用于正常膀胱上皮細胞后,其c-jun的水平明顯下降,從而導(dǎo)致活性蛋白-1(Activator Protein-1,AP1)的整體水平下降,其活性降低,AP-1調(diào)節(jié)靶基因的表達,包括細胞增殖、分化、炎癥、宿主反應(yīng)和惡變,而AP-1的活性降低則影響了抑癌基因P53及細胞周期調(diào)控基因P21(P21WAF1/CIP1)基因蛋白的表達,從而使細胞生長及增殖受到抑制,細胞則出現(xiàn)凋亡或死亡。HB-EGF在多種組織和細胞中表達,如血

3、管內(nèi)皮細胞、骨骼肌細胞、膀胱上皮細胞、角質(zhì)細胞和腫瘤細胞等,對多種細胞具有促分裂增殖的作用。HB-EGF對膀胱腫瘤細胞具有較強的促其增生的作用,而APF具有強烈抑制HB-EGF功能和分泌的作用,從而抑制膀胱腫瘤細胞生長及增生。通過四唑鹽比色法(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di.phenytetrazoliumromide,MTT)檢測APF對膀胱癌細胞生長及增殖影響；通過Western bl

4、ot方法檢測不同濃度的有活性APF和無活性APF對膀胱癌細胞中c-jun與HB-EGF的影響,從而進一步探討APF對膀胱癌細胞生長及增殖的影響。
　　 方法：
　　 培養(yǎng)膀胱癌細胞T-24細胞系,將有活性APF及無活性APF取不同濃度分為實驗組和對照組,作用于膀胱癌T-24細胞。通過MTT用酶聯(lián)免疫檢測儀0D490nm處測量各組的吸光值來檢測膀胱癌細胞增殖率；通過Western blot方法得到c-jun與HB-EGF的

5、電泳圖像,根據(jù)電泳圖象所得條帶的寬度和亮度進行半定量分析來檢測 APF對膀胱癌T-24細胞中c-jun與HB-EGF蛋白表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 MTT得出結(jié)果用酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值,顯示隨著有活性APF濃度的增加,OD490nm處吸光值明顯減低,其吸光值減低有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而加入無活性.APF吸光值無明顯變化,與實驗對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。根據(jù)電泳圖象所得

6、條帶的寬度和亮度進行半定量分析,顯示隨著有活性APF濃度增加,c-jun與HB-EGF表達逐漸減少,不同有活性APF濃度組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),無活性.APF組與有活性APF0μg組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 APF可能影響AP-1中的c-jun的表達,c-jun 直接作用于細胞橋接使細胞生長停滯,APF作用細胞后,其c-jun的水平明顯下降,從而導(dǎo)致.AP-1的整體水平下降,