癌癥治療用光敏劑福大賽因的質(zhì)量研究及HPLC-DAD-MS法測定藏藥手掌參旺拉有效成分的含量.pdf

1、本文共分為兩部分，第一部為癌癥治療用光敏劑福大賽因的質(zhì)量研究，第二部分為HPLC/DAD/MS法測定藏藥手掌參旺拉有效成分的含量。
　　 第一部分主要闡述了一類新藥癌癥治療用光敏劑福大賽因的質(zhì)量研究，包括了4個酞菁化合物同分異構(gòu)體的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定以及含量測定方法學(xué)的研究。癌癥治療光敏劑福大賽因，是由4個異構(gòu)體組成的ZnPcS2P2型取代酞菁化合物的混合物，目前正在進行臨床試驗。為了更好地對福大賽因進行質(zhì)量研究和質(zhì)量控制，需要

2、對這4個結(jié)構(gòu)相似、化學(xué)性質(zhì)相近的同分異構(gòu)體進行分離純化，制備FD-1，F(xiàn)D-2，F(xiàn)D-3、FD-44個酞菁化合物對照品，并進行FD-1，F(xiàn)D-2，F(xiàn)D-3，F(xiàn)D-44種同分異構(gòu)體HPLC/DAD含量測定方法學(xué)的研究，以單一成分來控制福大賽因的質(zhì)量。
　　 采用反相C18半制備柱（Grace Allsphere ODS-25μ250×10mm），以甲醇-乙腈-離子對緩沖鹽溶液為流動相，通過反復(fù)進樣分離和制備4個同分異構(gòu)體。由于使用

3、了不揮發(fā)性鹽類及離子對試劑，故需要脫鹽純化對照品。首先采用SPE C18反相固相萃取小柱，依次以水、甲醇分別洗脫緩沖鹽和離子對試劑和樣品。除鹽不完全部分又經(jīng)過Sepherdex LH-20凝膠柱進一步進行分離，以甲醇洗脫分離法對4個單體進行脫鹽純化，得到4個異構(gòu)體的純品，并進行核磁共振1H譜，gCOSY，NOE1D譜測定。通過已知的酞菁母核結(jié)構(gòu)特征，推斷4個異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)，分別為6，5'''-二磺酸基-5'，5"-二鄰苯二甲酰亞胺甲基酞菁

4、鋅二鉀鹽；6，5'''-二磺酸基-6'，6"-二鄰苯二甲酰亞胺甲基酞菁鋅二鉀鹽；6，5'''-二磺酸基-5'，6"-二鄰苯二甲酰亞胺甲基酞菁鋅二鉀鹽：6，5'''-二磺酸基-6'，5"-二鄰苯二甲酰亞胺甲基酞菁鋅二鉀鹽。
　　 比較并優(yōu)化了不同的色譜柱、流動相類型，以定量分析福大賽因4個不同的同分異構(gòu)體。確定以反相C18色譜柱（GraceSmart RP185μ，4.6×150mm），以乙腈-0.01M十六烷基三甲基溴化銨-0.

5、01M KH2PO4（用KOH試液調(diào)pH值到6.8）為流動相進行梯度洗脫（0min60％→30min65％），流速為1.0ml·min-1，在674nm波長處檢測，4個同分異構(gòu)體FD-1，F(xiàn)D-2，F(xiàn)D-3，F(xiàn)D-4得到較好分離，分離度分別為2.5，1.20，1.33，1.8。同時對FD-1，F(xiàn)D-2，F(xiàn)D-3，F(xiàn)D-4四個異構(gòu)體進行方法學(xué)研究，4個異構(gòu)體在測定范圍內(nèi)0.005～10.0μg呈良好的線性關(guān)系，方法的精密度（以R.S.D.

6、％表示）分別為0.12％，0.66％，0.99％，1.21％，最低檢出限分別為15ng，20ng，12ng，25ng。
　　 本課題首次分離制備出了4個異構(gòu)體的單體，并進行FD-1，F(xiàn)D-2，F(xiàn)D-3，F(xiàn)D-44種同分異構(gòu)體HPLC/DAD含量測定方法學(xué)的研究，以單一成分來控制福大賽因的質(zhì)量，并測定了9份不同批次的樣品，完善了福大賽因的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　 第二部分主要闡述了HPLC/DAD/MS法測定藏藥手掌參旺拉有效成分

7、的含量，并進行質(zhì)量研究。蘭科手參屬植物手參Gymnadenia concpsea R Brown的塊根別名旺拉、手掌參、佛手參、手兒參。有填精補髓、增強體質(zhì)、生津止渴、安神增智的功效，主要有效成分有dactylorhin B，loroglossin，dactylorhin A，militarine。本研究建立了HPLC/DAD/MS方法同時測定手掌參旺拉中4種促智類有效成分的含量，并對不同產(chǎn)地的旺拉進行含量測定，以建立旺拉的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

8、。方法采用C18反相色譜柱，以甲醇-水梯度洗脫（0min15％→10min20％→20min45％→35min70％），流速0.7ml·min-1，在222nm波長處檢測4種有效成分的的含量。正交實驗優(yōu)化藥材提取方法并測定25個不同產(chǎn)地樣品的含量。dactylorhin B，loroglossin，dactylorhin A，militarine線性范圍為dactylorhin B0.2～4.0μg，loroglossin0.01～5.

9、0μg，dactylorhin A0.08～4.5μg，militarine0.08～4.5μg；方法的回收率為99.00％～99.52％（RSD<2％），最低檢出限分別為15ng，15ng，10ng，20ng，樣品溶液的日內(nèi)差和日間差測定結(jié)果分別為日內(nèi)精密度0.3％，0.4％，0.4％，0.5％；日間精密度1.2％，1.5％，1.4％，1.5％。建立的HPLC/DAD/MS方法能簡便快速的測定旺拉中有效成分的含量，鑒別不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量