參芍口服液對大鼠主動脈粥樣硬化的療效及其機制.pdf

1、目的:
　　 冠心病（coronaryarterydisease，CAD）作為一種常見的心血管系統(tǒng)疾病，是導致中老年死亡的首要原因，現(xiàn)代醫(yī)學認為CAD的發(fā)病基礎為動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，而AS是一種多因素參與的病理過程，其發(fā)病機制與血管內皮損傷、脂質的氧化與浸潤、炎癥細胞滲透、免疫性細胞因子的表達、氧化損傷、血管平滑肌細胞增殖與凋亡失衡、鈣離子內流升高致使平滑肌細胞(vascularsmoothmu

2、sclecells，VSMC)內鈣超載等多個病理環(huán)節(jié)有關。上述機制在導致粥樣斑塊侵蝕和崩解的過程中起了關鍵作用，而針對這些病理環(huán)節(jié)進行靶向治療有望成為防治AS的有效手段之一。
　　 參芍口服液是臨床上治療AS有效的中藥復方制劑，課題組前期研究顯示，參芍口服液能夠通過降低心肌梗死模型大鼠的血管內皮細胞黏附分子-1和E-選擇素的表達，減輕氧自由基過氧化損傷，保護心肌線粒體結構及功能等多個途徑發(fā)揮心肌細胞保護作用，但其對心血管系統(tǒng)的保

3、護機制仍不確切，尤其是對動脈粥樣硬化的療效和機制仍未所知。
　　 本研究分三部分，通過構建大鼠主動脈粥樣硬化模型，并用參芍口服液進行治療，觀察本方對大鼠主動脈粥樣硬化模型的療效，并在血脂水平、氧化應激、炎癥因子表達這三個方面探討其作用機制，為本方的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)和實驗基礎。
　　 方法:
　　 50只SD大鼠隨機分為5組（每組10只），分組為:1）空白對照組;2)模型組:采用維生素D3腹腔注射+高脂飲食制

4、作動脈粥樣硬化模型大鼠;3）參芍口服液低劑量治療組;4）參芍口服液高劑量治療組;5）辛伐他汀治療組?？瞻讓φ战M常規(guī)飼養(yǎng)，模型組和治療組給予高脂飲食+VD360萬IU/kg/d腹腔注射3天。4周后灌胃給藥，參芍口服液低、高劑量組分別按4ml/d、8ml/d給藥，辛伐他汀組按5mg/kg/d給藥，其余組給予生理鹽水灌胃處理，持續(xù)給藥8周后處死。股動脈取血，采用直接測定法測定各組血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯

5、(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇（Low-densitylipoproteincholesterol，LDL-C）;采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)測定各組血清中丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽過氧化酶(glutathioneperoxidase，GSH-PX);紫外分光法檢測過氧化氫酶(catalase，CAT)、超氧化物歧

6、化酶(superoxidedismutase，SOD)含量，觀察參芍口服液對氧化應激損傷的影響;行HE染色觀察各組大鼠主動脈粥樣硬化病變程度;采用免疫組織化學染色法觀察細胞間粘附分子-1(Intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)、血管細胞粘附分子-1(Vascularcelladhesionmolecule，VCAM-1)、白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、白介素-17A(I

7、nterleukin-17A，IL-17A)、白介素-23(Interleukin-23，IL-23)和α平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)在主動脈上的表達;采用Westernblot檢測主動脈組織ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A、IL-23的蛋白表達。
　　 結果:
　　 1、參芍口服液對大鼠主動脈粥樣硬化病理形態(tài)的影響
　　 HE染色顯示，大鼠主動脈粥樣硬

8、化模型組主動脈管腔變窄，內膜增厚，向管腔內突起，內膜下可見大量平滑肌細胞增殖，出現(xiàn)脂質斑塊和泡沫細胞積聚，斑塊底部可見鈣質沉積和泡沫細胞壞死區(qū)域。彈力纖維變性、崩解和斷裂，中膜萎縮，導致動脈壁三層結構紊亂。在內膜和中膜可見較多的斑塊和炎細胞浸潤。而在參芍口服液治療組，尤其是高劑量治療組，動脈粥樣硬化斑塊病變程度明顯減輕。
　　 2、參芍口服液對大鼠主動脈粥樣硬化模型血脂水平的影響
　　 與空白對照組相比，大鼠主動脈粥樣硬

9、化模型血清中TC、TG、LDL-C含量明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而給予參芍口服液治療，能夠顯著降低大鼠主動脈粥樣硬化模型的血脂水平，且高劑量參芍口服液組低于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)，陽性藥物對照辛伐他汀治療組與模型組相比，血脂水平降低，高劑量參芍口服液組與辛伐他汀組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 3、參芍口服液對大鼠主動脈粥樣硬化模型氧化應激水平的影響
　　 與空白對照組比較，

10、大鼠主動脈粥樣硬化模型組中血清MDA含量明顯升高，GSH-PX、CAT、SOD含量降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;予以參芍口服液或辛伐他汀能夠顯著抑制該變化。其中，高劑量參芍口服液組與辛伐他汀組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);高劑量參芍口服液組MDA含量低于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)，GSH-PX、CAT、SOD含量高于低劑量參芍口服液組(P＜0.05)。
　　 4、參芍口服液對大鼠主動脈粥樣硬化模型炎

11、癥因子表達的調控作用
　　 免疫組織化學染色結果提示，ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A和IL-23在大鼠主動脈粥樣硬化模型中主動脈內膜呈陽性表達，而在正常對照組未見陽性表達。而予以參芍口服液或辛伐他汀治療，ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-17A和IL-23陽性顯色明顯減弱。
　　 采用Westernblot進行定量分析，結果顯示，與空白對照組比較，模型組主動脈ICAM-1、VCAM-1、

12、IL1β、IL-17A、IL-23蛋白表達明顯增高，分別為空白對照組的3.07、2.92、2.42、3.21和2.34倍，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。予以高劑量參芍口服液抗動脈粥樣硬化治療8周后，ICAM-1、VCAM-1、IIL1β、L-17A和IL-23明顯下調，分別是模型組的57.65％、52.05％、65.7％、59.5％和50.43％;低劑量參芍口服液治療組，分別下調為模型組的64.16％、71.92％、84.3％、