輔酶Q10對(duì)大鼠主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病的病理基礎(chǔ)，血脂代謝異常、氧化應(yīng)激和炎癥損傷在AS的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，因此對(duì)以上環(huán)節(jié)進(jìn)行有效干預(yù)是防治AS的重要方法。輔酶Q10是一種常見的抗氧化劑，有清除自由基和阻止脂質(zhì)過(guò)氧化的作用，但其對(duì)AS的影響及機(jī)制目前仍不清楚。本研究分臨床與基礎(chǔ)研究?jī)刹糠?，首先探討冠心病患者血清?duì)氧磷酶1(paranoxonase,PON1)與脂蛋白磷脂酶A2(lipoprotein-a

2、ssociated phospholipase A2，LP-PLA2)活性與冠脈病變支數(shù)及粥樣斑塊穩(wěn)定性的相關(guān)性。然后通過(guò)構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型，給予輔酶Q10治療，從病理形態(tài)學(xué)角度觀察輔酶Q10對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊的影響，隨后再進(jìn)一步研究輔酶Q10對(duì)AS模型大鼠血脂、氧化應(yīng)激水平和炎性因子表達(dá)的影響，為輔酶Q10治療AS相關(guān)性疾病提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：經(jīng)冠脈造影術(shù)(coronary angiography，CAG)確診冠心病

3、患者88例作為研究組，同期行CAG排除冠心病的犯例受檢者為對(duì)照組。冠心病患者按照冠脈病變支數(shù)分為:1)單支病變;2)雙支病變;3)三支病變。穩(wěn)定性心絞痛提示斑塊穩(wěn)定，心肌梗死患者提示斑塊不穩(wěn)定。所有入選對(duì)象均采用連續(xù)檢測(cè)法檢測(cè)血清PON1，LP-PLA2活性，對(duì)PON1，LP-PLA2活性與冠脈病變支數(shù)及斑塊穩(wěn)定性進(jìn)行相關(guān)性分析。7只Wistar大鼠作為空白對(duì)照組(B組)，31只Wistar大鼠采用維生素D3腹腔注射+卵清白蛋白(OVA

4、)腹腔注射+高脂飲食制作動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠，13周后隨機(jī)抽取3只驗(yàn)證造模是否成功，確認(rèn)成功后將28只AS模型鼠隨機(jī)分為4組(每組7只)，AS模型對(duì)照組(A組)、輔酶Q10治療組(C組)、阿托伐他汀治療組(D組)、輔酶Q10+阿托伐他汀治療組(E組)?？瞻讓?duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，其他各組繼續(xù)給予高脂飲食。隨后灌胃給藥8周，每天1次，灌胃體積10ml/kg，A組、B組灌服等體積生理鹽水，C組灌服輔酶Q10 30mg/kg/d，D組灌服阿托伐他汀5

5、mg/kg/d，E組灌服輔酶Q10 30mg/kg/d+阿托伐他汀5mg/kg/d。8周后處死，腹主動(dòng)脈取血5ml，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血脂各項(xiàng)指標(biāo):血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酷(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholestero,LDL)、高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein cholestero

6、,HDL)、載脂蛋白B(apolipoprotein B，APOB)，并計(jì)算血脂比值（TCH/HDL，LDL/HDL）。采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定各組血清中丙二醛(malondialdehyde，MDA)和氧化修飾的高密度脂蛋白（oxidized HDL，ox-HDL）；采用連續(xù)檢測(cè)法檢測(cè)各組的LP-PLA2、PON1活性。取完整主動(dòng)脈HE染色觀察AS斑塊病理

7、形態(tài)，Masson染色觀察斑塊中膠原含量，圖像分析軟件計(jì)算校正斑塊面積（斑塊面積/血管橫截面積）與校正膠原面積（膠原面積/血管橫截面積）。免疫組化染色和Western blot定量分析斑塊內(nèi)白介素6（interleukin-6，IL-6）、LP-PLA2、可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(soluble Intercellular Adhesion Molecule-1，sICAM-1)表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.冠心病患者血清PO

8、N1活性明顯低于對(duì)照組（P<0.05）；活性均值隨冠脈病變支數(shù)增加而降低（P<0.05）；在斑塊不穩(wěn)定組PON1活性明顯低于斑塊穩(wěn)定組（P<0.05）。冠心病患者血清LP-PLA2活性均值明顯高于對(duì)照組（P<0.05），隨冠脈病變支數(shù)增加而升高（P<0.05），且與患者總膽固醇、低密度脂蛋白水平呈正相關(guān)。
　　2.與空白對(duì)照組相比，AS組血清TG、TC、LDL、APOB明顯上升，HDL下降，血清PON1活性下降和LP-PLA2活性

9、增高，ox-HDL及MDA含量上升，斑塊內(nèi)IL-6、LP-PLA2及sICAM-1表達(dá)增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。灌服輔酶Q10后血清HDL上升，血清PON1活性增加和LP-PLA2活性下降，血清ox-HDL及MDA下降。與AS模型組比較輔酶Q10組主動(dòng)脈AS斑塊病變程度減輕，膠原含量增加(P＜0.05)，主動(dòng)脈IL-6、LP-PLA2、sICAM-1表達(dá)顯著下降(P<0.05)。并且輔酶Q10可增強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照藥阿托伐他汀的