煦少火膠囊對家兔主動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)VEGF表達的影響.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是目前嚴重危害人類健康的一個多因素疾病，是引起冠心病最常見的原因，病變表現(xiàn)為在動脈內(nèi)壁形成富含脂質(zhì)膽固醇的粥樣斑塊。經(jīng)過長期的研究，人類認識到血脂增高和紊亂是大多數(shù)AS發(fā)生的前提和基礎(chǔ)，而血管內(nèi)皮功能障礙在其中起著關(guān)鍵性的作用。血管新生是AS重要的病理學特征，血管內(nèi)皮生長因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)是目前發(fā)現(xiàn)的唯一特異性促進血管

2、內(nèi)皮細胞有絲分裂的生長因子，AS時缺血、缺氧可引起局部VEGF表達增強。近些年來的研究表明中醫(yī)藥在抗AS方面，尤其在保護血管內(nèi)皮細胞上取得了可喜的成果，已成為目前研究的一個熱點。煦少火膠囊(由附子、西洋參、石菖蒲、丹參、枳殼、桔梗、葛根等組成)具有溫腎健脾，豁痰開竅，活血化瘀的作用，臨床試驗證實可有效治療AS相關(guān)性疾病。本課題擬通過對AS模型家兔的實驗研究，探討煦少火膠囊抗AS，保護血管內(nèi)皮功能的作用機理，以及為臨床用藥提供實驗依據(jù)。

3、 方法：選擇健康新西蘭純種雄性大白兔40只，體重2.5±0.5kg，家兔顆粒飼料平衡喂養(yǎng)1周后，隨機取6只作為正常對照組，用普通飼料喂養(yǎng)，其余34只為高脂造模組，給予高脂飼料喂養(yǎng)(含1％膽固醇、5％豬油、10％蛋黃粉、84％普通飼料)，每日清晨喂養(yǎng)，自由飲水。8周后高脂造模組取2只實驗家兔處死，光鏡下觀察，家兔動脈內(nèi)膜增厚，伴有大量泡沫細胞，內(nèi)皮細胞排列凌亂、不連續(xù)，大量平滑肌細胞遷移內(nèi)膜，視為造模成功。將成模的32只實驗動物隨機

4、分為高脂模型組、煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組，每組8只，除正常對照組(6只)仍喂養(yǎng)普通飼料外，其余各組喂養(yǎng)飼料分別為：高脂飼料、高脂飼料+煦少火膠囊1.0g/d/Kg、高脂飼料+通心絡(luò)膠囊1.0g/d/Kg、高脂飼料+辛伐他汀2.5mg/d/Kg，自由飲水，繼續(xù)喂養(yǎng)4周，實驗結(jié)束。最后一次給藥后空腹(禁食12-14小時)抽取家兔耳靜脈血5ml，混勻后注入塑料試管內(nèi)，4℃3500r/min離心15分鐘，吸取血清裝入普通試管-20℃密封保

5、存，供檢測各組家兔血清TC、TG、LDL、HDL、NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1a等指標使用。無菌操作選取升主動脈作為標本，用于病理組織學觀察。 結(jié)果：①對家兔血脂的影響：高脂模型組家兔血清TC、TG、LDL(23.24±4.101.33±0.0628.86±3.20)明顯增高，HDL(0.42±0.07)明顯低于正常對照組(P＜0.01);煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組家兔血清TC、TG、LDL水平均低于高脂模型

6、組，有顯著性差異(P＜0.01)；組間比較顯示，煦少火組血清TC、TG、LDL的變化與辛伐他汀組無顯著性差異(P＞0.05)，TG、LDL較通心絡(luò)組降低明顯(P＜0.05)；煦少火組和辛伐他汀組均有升高AS家兔血清HDL水平的作用，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，兩組間相比較差異亦具有顯著性意義(P＜0.05)，通心絡(luò)組HDL升高不顯著，與煦少火組相比較差異顯著(P＜0.01)。②對家兔一氧化氮(NO)、內(nèi)

7、皮素(ET)的影響：與正常對照組相比較，高脂模型組家兔NO含量(49.35±3.24)明顯降低(P＜0.01)，ET含量(120.36±6.38)明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)過4周治療后，三個治療組血清NO水平均較高脂模型組有明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)，而煦少火組升高更加明顯，與通心絡(luò)組、辛伐他汀組相比較有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);三組ET水平均有明顯下降，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01)，煦少

8、火組與通心絡(luò)組相比較雖無顯著性差異(P＞0.05)，但優(yōu)越于辛伐他汀組(P＜0.01)。③對家兔血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a)的影響：高脂模型組家兔血清TXB2含量(404.74±13.65)明顯高于正常對照組(P＜0.01)，血清6-Keto-PGF1a含量(204.32±12.94)明顯低于正常對照組(P＜0.01)。經(jīng)藥物干預(yù)，三組家兔血清TXB2均明顯降低，與高脂模型組相比較有顯著性差

9、異(P＜0.01)，煦少火組下降明顯，與通心絡(luò)組、辛伐他汀組相比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；三組家兔血清6-Keto-PGF1a均明顯高于高脂模型組，差異具有顯著性意義(P＜0.01)，但三組之間相比較無顯著性差異(P＞0.05)。④家兔主動脈病理組織學光鏡觀察：正常對照組家兔主動脈內(nèi)膜光滑，無脂質(zhì)斑塊形成，內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無泡沫細胞沉積；高脂模型組家兔主動脈內(nèi)膜粗糙不平，有多量粥樣硬化斑塊形成，輕者斑塊主要局

10、限于主動脈弓及分叉處，重者整條主動脈內(nèi)膜可見彌漫分布的粥樣硬化斑塊形成，斑塊面積占整條主動脈內(nèi)膜面積的比高達3.13±0.84，組織學切片見內(nèi)皮下大量泡沫細胞沉積；煦少火組、通心絡(luò)組、辛伐他汀組家兔主動脈內(nèi)膜雖可見粥樣硬化斑塊形成，但主要限于弓段和分叉處，斑塊面積占整條主動脈內(nèi)膜面積的比(0.75±0.890.63±0.740.88±0.83)，程度輕于高脂模型組(P＜0.01)，三個組之間相比較無顯著性差異(P＞0.05)，組織學切片

11、見內(nèi)皮下泡沫細胞沉積，但程度明顯輕于高脂模型組。⑤免疫組織化學染色：VEGF在正常對照組家兔主動脈內(nèi)膜基本無表達，高脂模型組家兔主動脈內(nèi)膜層染色呈棕黃色，VEGF強陽性表達，與正常對照組相比較差異有顯著性(P＜0.01)，煦少火組、通心絡(luò)組及辛伐他汀組家兔主動脈內(nèi)膜層染色呈淺黃色，VEGF弱陽性表達，與高脂模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01)，三個組之間相比較無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：“陽微陰弦”是胸痹的基本病因

12、病機,上焦陽虛，陰邪上乘，心脈被瘀血、痰飲、濕濁、寒邪阻滯，導致氣血運行不暢而發(fā)生本病。據(jù)此，我們根據(jù)《素問》“少火之氣壯”的理論，并結(jié)合臨床經(jīng)驗，采用“溫煦元氣，滌痰逐瘀”的治法，篩選了具有溫腎健脾，豁痰開竅，活血化瘀的中藥組成了煦少火膠囊。本實驗顯示：煦少火膠囊能明顯降低AS家兔血清TC、TG、LDL、ET、TXB2等含量，升高HDL、NO、6-Keto-PGF1a等水平，從而有效地減少脂質(zhì)沉著、縮小斑塊面積，保護動脈內(nèi)皮細胞，抑制