RAS阻斷劑對(duì)兔主動(dòng)脈粥樣硬化病變內(nèi)VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景： 作為目前所知的唯一特異性內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)一直是缺血性心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。VEGF促進(jìn)心肌或肢體缺血組織新生血管及側(cè)支循環(huán)形成，對(duì)預(yù)防動(dòng)脈管腔急性閉塞所引起的組織壞死具有重要意義。然而，越來(lái)越多的證據(jù)表明，粥樣病變中過(guò)度表達(dá)的VEGF通過(guò)介導(dǎo)內(nèi)膜炎癥反應(yīng)和血管新生，加劇粥樣硬化的進(jìn)展，降低斑塊的穩(wěn)定性，而他汀等抗粥樣

2、硬化藥物能下調(diào)VEGF的表達(dá)。抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system，RAS)的藥物，如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(Angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI)和血管緊張素受體拮抗劑(Angiotensin receptor blocker，ARB)具有抗動(dòng)脈粥樣硬化效應(yīng)，但它們是否影響粥樣病變中VEGF的表達(dá)，尚未見(jiàn)明確報(bào)道。 研究目的： 本

3、研究通過(guò)高脂喂養(yǎng)建立兔動(dòng)脈粥樣硬化模型，觀察血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑培哚普利(perindopril)和血管緊張素受體拮抗劑替米沙坦(telmisartan)對(duì)胸主動(dòng)脈粥樣硬化病變中VEGF mRNA和蛋白表達(dá)的影響，以及它們對(duì)外周血清中VEGF水平和斑塊形成的影響，探討ACEI及ARB抗粥樣硬化的新機(jī)制，為臨床實(shí)踐提供新的理論依據(jù)。研究方法： 28只雄性新西蘭大白兔，隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組(NL)、粥樣硬化模型組(AM)、培哚

4、普利治療組(PT)和替米沙坦治療組(TT)，每組各7只。NL組予普通飼料，其余各組予高脂飼料(含1﹪膽固醇、8﹪豬油、91﹪普通飼料)，均喂養(yǎng)12周。此外PT組和TT組于第9周起分別予培哚普利0.3mg/(kg·d)、替米沙坦3mg/(kg·d)灌胃至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。12周末，耳中央動(dòng)脈采血，檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的濃度。收集胸主動(dòng)脈，中性甲醛固定，石蠟

5、包埋切片，HE染色觀察斑塊形態(tài)，圖像分析軟件分析殘存管腔面積比、內(nèi)膜與中膜厚度比(IT/MT)、內(nèi)膜與中膜面積比(IA/MA)。RT-PCR法檢測(cè)胸主動(dòng)脈VEGF mRNA的表達(dá)。免疫組織化學(xué)法觀察血管壁VEGF蛋白的表達(dá)，圖像分析軟件分析內(nèi)膜VEGF陽(yáng)性染色面積比和平均光密度值。ELISA法測(cè)定耳中央動(dòng)脈血清VEGF濃度。所有計(jì)量資料均用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。4組間比較用單因素方差分析，2組間比較用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果用SPSS ForWindows10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。 結(jié)果： 1.培哚普利、替米沙坦對(duì)兔血脂水平的影響AM組、PT組和TT組血清各脂質(zhì)(TC、TG、LDL-C和HDL-C)水平均顯著高于NL組(P<0.05)，但3組問(wèn)各脂質(zhì)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變光鏡下見(jiàn)NL組動(dòng)脈層次結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)彈力板表面僅覆蓋單層內(nèi)皮細(xì)胞，未見(jiàn)內(nèi)膜增厚及粥樣斑塊形成。AM組見(jiàn)動(dòng)脈各層

7、交界處模糊，內(nèi)皮細(xì)胞缺損，內(nèi)膜明顯增厚，各部分厚薄不一，增厚內(nèi)膜以大量泡沫細(xì)胞為主，見(jiàn)散在平滑肌細(xì)胞，未見(jiàn)脂質(zhì)核心和纖維帽形成，相當(dāng)于美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)病理分型II型改變。 PT組和TT組內(nèi)膜病變程度較模型組減輕。與NL組(殘存管腔面積比為1±0，IT/MT與IA/MA均近似為0)相比較，AM組、PT組和TT組殘存管腔面積比(分別為0.676±0.020、0.915±0.031和0.899±0.045)均顯著減少(P<0.05)，而

8、IT/MT(分別為2.063±0.406、0.824±0.101和1.004±0.137)、IA/MA(分別為1.902±0.220、0.918±0.203和0.812±0.099)均顯著增加(P<0.05)。PT組和TT組殘存管腔面積比均較AM組增加(P<0.05)，其余兩項(xiàng)指標(biāo)值均較AM組降低(P<0.05)。而三項(xiàng)指標(biāo)值在PT組和TT組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.培哚普利、替米沙坦對(duì)胸主動(dòng)脈VEGF mR

9、NA表達(dá)的影響AM組、PT組和1vr組VEGF mRNA表達(dá)(分別為0.751±0.279、0.438±0.203和0.467±0.211)均顯著高于NL組(0.146±0.049)(P<0.05)。與AM組相比，PT組和TT組VEGF mRNA表達(dá)均顯著下降(P<0.05)，而PT組和TT組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.培哚普利、替米沙坦對(duì)胸主動(dòng)脈VEGF蛋白表達(dá)的影響NL組胸主動(dòng)脈內(nèi)膜及中膜均未見(jiàn)VEGF表達(dá)，

10、僅外膜見(jiàn)散在、微弱著色。AM組胸主動(dòng)脈全層均有VEGF蛋白表達(dá)，其中以內(nèi)膜強(qiáng)陽(yáng)性染色為顯著，VEGF主要表達(dá)于泡沫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)以及部分細(xì)胞外間質(zhì)中，中膜內(nèi)層平滑肌細(xì)胞亦有較明顯表達(dá)。PT組和TT組VEGF表達(dá)較模型組明顯減弱。 圖像分析結(jié)果顯示，與NL組(平均光密度值與陽(yáng)性面積比均近似為0)相比較，AM、PT組和TT組內(nèi)膜VEGF平均光密度值(分別為0.0388±0.0033、0.0097±0.0016和0.0114±0.0

11、038)和陽(yáng)性面積比(分別為0.2981±0.0196、0.0890±0.0102和0.1017±0.0273)均顯著增加(P<0.05)。而PT組和TT組兩項(xiàng)指標(biāo)值均較AM組降低(P<0.05)，PT組與TT組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5.培哚普利、替米沙坦對(duì)兔血清VEGF水平的影響與NL組(17.95±3.29 pg/ml)比較，AM組、PT組和TT組血清VEGF水平(分別為111.83±10.37 pg/m

12、l、50.50±6.87 pg/ml和58.66±9.62 pg/ml)均顯著增高(P<0.05)。與AM組相比，PT組和TT組VEGF水平均顯著降低(P<0.05)，而PT組與TT組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1．正常主動(dòng)脈內(nèi)膜無(wú)VEGF表達(dá)，粥樣硬化內(nèi)膜VEGF表達(dá)顯著增加。 2．培哚普利和替米沙坦能抑制動(dòng)脈粥樣硬化病變中VEGF m-RNA及蛋白的表達(dá)，同時(shí)降低外周血中VEGF水平。