microRNA-let7d在注意缺陷多動障礙兒童血清中表達的初步研究.pdf

1、注意缺陷多動障礙（ADHD）是兒童少年最常見的行為醫(yī)學(xué)疾病之一，以注意缺陷和（或）沖動、多動為特征，并伴有認(rèn)知障礙和學(xué)習(xí)困難。ADHD分三種亞型，以注意力缺陷為主型（ADHD-AI）、以多動為主型(ADHD-HI)、混合型(ADHD-C)。ADHD在世界各國的流行率存在很大差異，為2.2～17.8％不等，在男孩中更常見，一般認(rèn)為男女比例為4～9∶1。中國兒童ADHD流行率報道為3％～10％，男童與女童性別比為3∶1。大約80％ ADHD

2、兒童，其癥狀將持續(xù)到青少年期，40％持續(xù)到成年，30％將持續(xù)終身，對患者的學(xué)業(yè)、職業(yè)和社會生活等方面產(chǎn)生廣泛而消極的影響。ADHD作為一種慢性疾病將影響患者終身已成為共識。ADHD病因和發(fā)病機制至今不明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為遺傳與環(huán)境因素共同參與其發(fā)病，并與腦結(jié)構(gòu)和功能異常有關(guān)。
　　隨著先進技術(shù)的不斷融入，近年來較多學(xué)者針對ADHD病因及發(fā)病機理進行了大量研究。ADHD動物模型SHR大鼠與對照組WKY大鼠的cDNA芯片、蛋白芯片以及m

3、iRNA芯片用來闡述ADHD發(fā)生、發(fā)展相關(guān)基因的研究已經(jīng)取得了很大的進步，但是仍然沒有一個高效的早期診斷指標(biāo)。
　　最近研究表明，循環(huán)中microRNAs(miRNAs)有廣泛的生物學(xué)功能，在人體生理與病理過程發(fā)揮重要作用，可作為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病與腫瘤的敏感生物學(xué)標(biāo)記。血液循環(huán)中microRNAs穩(wěn)定存在，其差異表達可以作為血液中檢測腫瘤診斷分型、治療與判斷預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)記。我們前期實驗證明了，ADHD大鼠模型rno-let-7d

4、表達升高，相應(yīng)負(fù)性調(diào)控Galectin-3表達降低。但是在兒童ADHD血清中miR-let7d與Galectin-3是否穩(wěn)定表達存在，是否可以作兒童ADHD診斷與分型的標(biāo)記物尚無報道。
　　[目的]研究ADHD兒童血清miR-let7d與Galectin-3是否表達存在，以及與健康兒童（對照組）是否存在差異表達，是否可以作為ADHD的診斷與分型的生物學(xué)標(biāo)記。
　　[方法]收集溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院2009年1月～2009

5、年12月共70例病例，其中ADHD組35例，對照組35例，運用qRT-PCR檢測血清中miR-let7d的mRNA表達水平，運用Western blot檢測血清中Galectin-3的蛋白表達水平。利用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析比較兩組兒童血清中miR-let7d與Galectin-3表達水平的差別。
　　[結(jié)果]采用qRT-PCR方法檢測ADHD組兒童與對照組兒童血清中的microRNAs，miR-15b、miR-337-5p

6、、miR-503及miR-let7d在兒童血清中均表達存在。miR-15b作為內(nèi)參，Ct（閾值循環(huán)）值計算表達水平，兒童ADHD組血清miR-let7d表達明顯高于對照組(均數(shù):Control=29.35，ADHD=26.69，F(xiàn)=0.359，P=0.015＜0.05)，ADHD亞型ADHD-C血清miR-let7d表達升高(P＜0.05)，而亞型ADHD-AI與ADHD-HI均沒有明顯改變(P＞0.05)。而血清中miR-337-5p

7、（均數(shù):Control=29.83，ADHD=30.52，F(xiàn)=0.053，P=0.754＞0.05）與miR-503(均數(shù):Control=23.84，ADHD=24.85，F(xiàn)=0.027，P=0.662＞0.05)均無顯著差異性變化。采用Westert blot方法檢測兒童ADHD組與對照組血清中的蛋白，Galectin-3在兒童血清中表達存在，其中Galectin-3表達降低與升高樣本百分?jǐn)?shù)別為65.71％與22.86％，經(jīng)卡方檢驗

8、有顯著差異性變化(P＜0.05)。ADHD亞型中ADHD-C、ADHD-AI、ADHD-HI中Galectin-3表達降低樣本百分?jǐn)?shù)分別為61.91％、66.67％、80.00％，各型中Galectin-3表達降低與升高百分?jǐn)?shù)經(jīng)卡方檢驗有顯著差異性變化(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]MiR-let7d在ADHD兒童血清中表達升高，亞型ADHD-C血清miR-let7d表達升高，而亞型ADHD-AI與ADHD-HI而沒有明顯改變;G