SNAP-29分子在胞吐中的功能研究.pdf

1、該項(xiàng)研究采用國外新近建立的一種對(duì)可能調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)釋放的蛋白分子進(jìn)行功能研究的實(shí)驗(yàn)方法一PCl2細(xì)胞分泌分析系統(tǒng)對(duì)SNAP- 29分子在胞吐中可能起的調(diào)節(jié)功能做進(jìn)一步的研究.該系統(tǒng)可以研究各種蛋白在胞吐(exocytosis)過程中的作用.該方法是將編碼hGH(人生長激素)的質(zhì)粒和編碼所感興趣蛋白的質(zhì)粒瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中,hGH可作為胞吐的一個(gè)報(bào)告物,當(dāng)PC12細(xì)胞受到刺激后,hGH會(huì)分泌出來,感興趣蛋白對(duì)hGH分泌的

2、影響反映了它對(duì)胞吐過程起的作用.該項(xiàng)研究首先對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行了優(yōu)化,分別觀察了細(xì)胞鋪板密度、DNA 數(shù)量、DNA與脂質(zhì)體的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響.同時(shí)采用表達(dá)綠色熒光蛋白的商品化質(zhì)粒載體pEGFP-N3轉(zhuǎn)染PCl2細(xì)胞,利用綠色熒光蛋白作為報(bào)s告物來檢測(cè)PCI2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,確立了最佳轉(zhuǎn)染條件:6孔板每孔種1.5×10<'6>個(gè)PC12細(xì)胞,DNA總量為4.5ug,DNA與陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine<'TM>20