GDF15分子對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響.pdf

1、腫瘤嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。近年來(lái)除手術(shù)、放療、化療、生物治療等治療方法外，腫瘤的免疫治療越來(lái)越受到重視。腫瘤免疫治療的目的是激發(fā)或調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境的抗腫瘤免疫力，從而控制和殺傷腫瘤細(xì)胞。但是進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)修飾自身表面抗原及改變腫瘤組織周?chē)奈h(huán)境以影響免疫細(xì)胞的功能，從而逃避機(jī)體的免疫識(shí)別與攻擊。
　　目前主要從與腫瘤細(xì)胞和腫瘤抗原自身相關(guān)的機(jī)制及與宿主免疫系統(tǒng)相關(guān)的機(jī)制這兩方面來(lái)研究腫瘤免疫逃逸。

2、其中，荷瘤機(jī)體中的免疫功能障礙是導(dǎo)致機(jī)體免疫應(yīng)答低下和腫瘤逃逸免疫調(diào)控的主要機(jī)制，是限制腫瘤免疫治療的重要因素，而抗原遞呈細(xì)胞（APC）特別是樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）功能的改變發(fā)揮了重要作用。樹(shù)突狀細(xì)胞從骨髓造血干細(xì)胞到功能完善的成熟DC經(jīng)過(guò)了一系列的過(guò)程，腫瘤不但可以直接誘導(dǎo)DC凋亡，還可以通過(guò)干擾DC分化的多個(gè)環(huán)節(jié)使腫瘤患者體內(nèi)DC數(shù)量下降，成熟受到抑制，功能發(fā)生障礙，從而下調(diào)或抑制DC的抗原遞呈及免疫起始功能。目前已知部分腫瘤細(xì)胞膜分子

3、或分泌的源性因子參與了這一過(guò)程，但是在腫瘤復(fù)雜的微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞分泌大量的分子，究竟是腫瘤細(xì)胞的哪些表面分子或源性因子與DC相互作用而導(dǎo)致了腫瘤免疫逃逸調(diào)控，仍有待進(jìn)一步研究。
　　為了系統(tǒng)全面的研究可能參與影響樹(shù)突狀細(xì)胞功能的腫瘤細(xì)胞相關(guān)分子，本研究進(jìn)行了以下三個(gè)方面的工作：首先，通過(guò)購(gòu)買(mǎi)已構(gòu)建好的人肝癌T7噬菌體cDNA文庫(kù)，對(duì)從體外培養(yǎng)誘導(dǎo)分化的未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行4輪生物淘選，將經(jīng)ELISA鑒定為與未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞特異性

4、結(jié)合的噬菌體單克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序和同源性分析，將獲得的候選分子進(jìn)行生物信息學(xué)分析，初步了解其研究進(jìn)展及功能。然后，擬通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定并分析GDF15在肝癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)：（1）采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞中GDF15的mRNA轉(zhuǎn)錄；（2）通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞中GDF15蛋白的表達(dá)；（3）經(jīng)激光共聚焦檢測(cè)GDF15在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)和定位；（4）應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)GDF15在肝癌組織切片中的表達(dá)和定位。最后，擬通

5、過(guò)將外源性GDF15與DC共培養(yǎng)，從不同方面來(lái)鑒定GDF15影響DC的成熟：（1）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GDF15對(duì)DC表型的影響；（2）掃描電鏡觀察GDF15對(duì)DC形態(tài)的影響；（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GDF15對(duì)DC吞噬能力的影響；（4）利用ELISA檢測(cè)GDF15對(duì)DC分泌IL-12的影響。本研究獲得了以下結(jié)果：①獲得一系列與樹(shù)突狀細(xì)胞特異性結(jié)合的腫瘤細(xì)胞表面分子和源性因子（人鐵蛋白輕鏈、甲胎蛋白、α1微球蛋白前體、生長(zhǎng)分化因子15等），初步評(píng)

6、估了篩選蛋白的可能意義、相互結(jié)合受體和作用途徑以及研究進(jìn)展后，我們以GDF15為靶分子，以研究其對(duì)DC功能的影響；②GDF15主要定位于胞漿中，在肝癌中的表達(dá)水平明顯高于正常肝臟細(xì)胞；③在DC的培養(yǎng)上清中加入GDF15能顯著抑制未成熟DC的表型向成熟DC轉(zhuǎn)化，初步證實(shí)GDF15參與抑制DC的分化成熟。
　　綜上所述，本研究通過(guò)肝癌噬菌體cDNA展示文庫(kù)技術(shù)篩選獲得了一些未曾報(bào)道的能與DC相互作用的分子，并以GDF15為切入點(diǎn)，初步