小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞上4-1BB分子的功能研究.pdf

1、樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)是體內(nèi)功能最強(qiáng)的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞(APC)，能攝取并加工處理免疫原性多肽，以MHC分子-抗原肽復(fù)合物形式表達(dá)于細(xì)胞表面，MHC分子/抗原肽復(fù)合物能被抗原特異性T細(xì)胞受體(TCR)識(shí)別，聯(lián)合DCs表面的共刺激分子，為T(mén)細(xì)胞相關(guān)免疫反應(yīng)提供了啟動(dòng)信號(hào)，進(jìn)而通過(guò)輔助型T細(xì)胞調(diào)節(jié)B細(xì)胞增值，在免疫應(yīng)答和免疫耐受的誘導(dǎo)中具有獨(dú)特的地位，是介導(dǎo)先天性免疫和獲得性免疫的橋梁。 DCs以未成熟狀態(tài)廣泛分布于人體各器官，在攝取

2、抗原或接受到炎癥因子如LPS、IL-1、TNF-α、CD40配體刺激后，DCs吞噬能力下降，表面黏附分子表達(dá)發(fā)生改變，CD80、CD86、MHC Ⅱ等表面分子表達(dá)升高，進(jìn)入成熟狀態(tài)，轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)T細(xì)胞區(qū)域，刺激T細(xì)胞分化增殖，從而啟動(dòng)免疫應(yīng)答。 4-1BB分子(CD137)為Ⅰ型糖蛋白，是腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族的重要成員。4-1BB分子首先發(fā)現(xiàn)于小鼠活化T細(xì)胞表面，在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

3、和骨髓來(lái)源的單核、多個(gè)核細(xì)胞上都有表達(dá)，該分子提供的共刺激信號(hào)能有效促進(jìn)CD4+、CD8+T細(xì)胞增殖以及細(xì)胞因子分泌，維持T細(xì)胞較長(zhǎng)時(shí)間克隆擴(kuò)增并拮抗活化誘導(dǎo)凋亡(AICD)。最近有研究表明，DCs也可組成型表達(dá)4-1BB分子，并且該分子介導(dǎo)的信號(hào)能促進(jìn)DCs表型的改變以及功能的成熟。 本研究使用4-1BB激發(fā)型抗體2A激發(fā)經(jīng)過(guò)磁珠純化的小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(BMDC)表面4-1BB分子，以揭示DCs表面4-1BB分子的功能。

4、 本文第一部分研究了4-1BB分子激發(fā)對(duì)腫瘤上清誘導(dǎo)的DCs凋亡的拮抗作用。研究結(jié)果表明，通過(guò)4-1BB激發(fā)型抗體2A激發(fā)DCs上4-1BB信號(hào)可以有效對(duì)抗小鼠黑色素瘤B16上清所誘導(dǎo)的DCs凋亡，和CD40激發(fā)型抗體lcl0所介導(dǎo)的CD40信號(hào)效果類(lèi)似但較弱。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，激發(fā)4-1BB信號(hào)可以誘導(dǎo)DCs胞內(nèi)NF-κB p65亞基從胞漿向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，表明DCs上4-1BB信號(hào)可能通過(guò)包含NF-κB在內(nèi)的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑達(dá)到抗凋

5、亡功能。 第二部分研究了經(jīng)過(guò)4-1BB激發(fā)成熟的DCs對(duì)T細(xì)胞的影響。檢測(cè)表明，淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)3~5天后，CD40和4-1BB信號(hào)刺激后DCs組均可在顯微鏡下觀察到CD4+T細(xì)胞的增殖。在培養(yǎng)第5天，我們檢測(cè)到CD40和4-1BB信號(hào)刺激后DCs可使部分CD4+T表面出現(xiàn)Th1細(xì)胞標(biāo)志性分子Tim3的表達(dá)。這說(shuō)明經(jīng)過(guò)4-1BB信號(hào)刺激分化成熟的DCs能有效刺激CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化增殖。但在增殖的同時(shí)，和CD40信號(hào)組

6、不同，我們觀察到4-1BB信號(hào)組出現(xiàn)強(qiáng)烈T細(xì)胞凋亡，并且凋亡率隨著時(shí)間的增加而增長(zhǎng)。 本研究表明，DCs上4-1BB信號(hào)的激活能通過(guò)包含NF-κB通路在內(nèi)的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑向DCs傳遞一個(gè)免疫信號(hào)，增強(qiáng)DCs對(duì)抗腫瘤上清誘導(dǎo)凋亡的能力，并能通過(guò)激活DCs,刺激部分CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化增殖。但同時(shí)，4-1BB信號(hào)活化的DCs可能通過(guò)某種途徑誘導(dǎo)活化的CD4+T細(xì)胞凋亡。這些研究結(jié)果將為4-1BB激發(fā)型抗體的腫瘤免疫治療和