KIF11調(diào)控EGF介導(dǎo)的細(xì)胞趨向性遷移.pdf

1、腫瘤惡性轉(zhuǎn)移是引起癌癥相關(guān)疾病死亡率的主要原因，是腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤經(jīng)細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)入血管，對(duì)不同趨化信號(hào)反應(yīng)而定向遷移的結(jié)果。微管受調(diào)控感應(yīng)方向信號(hào)，并做出反應(yīng)，這對(duì)細(xì)胞極性和遷移很重要；目前的模型還無法解釋細(xì)胞缺乏趨化信號(hào)時(shí)偏向某一個(gè)方向遷移的具體機(jī)制，微管極性核心調(diào)控機(jī)制也不清楚。
　　我們以人的乳腺腫瘤細(xì)胞 MDA-MB-231/IMP1細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過兩種不同shRNA編碼慢病毒感染方式，使微管驅(qū)動(dòng)蛋白 KIF11(也

2、稱 Eg5)被穩(wěn)定敲減，文中分別用kdKIF11-1，kdKIF11-2表示。蛋白質(zhì)免疫印跡分析顯示KIF11被shRNA成功敲減，分別低表達(dá)58﹪和79﹪，但Rac1表達(dá)水平并未受到影響；實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系也保持著清晰一致的微管結(jié)構(gòu)。同對(duì)照組細(xì)胞(慢病毒載體感染)相比，劃痕實(shí)驗(yàn)中，兩組低表達(dá)細(xì)胞系的移動(dòng)速度呈現(xiàn)14-45％的增加；相對(duì)地，在基質(zhì)膠包被transwell的侵襲試驗(yàn)中，低表達(dá)KIF11細(xì)胞侵襲能力下降了70%。為確定細(xì)胞侵襲能力下

3、降是否受趨化性影響，我們用膠原代替基質(zhì)膠，并用表皮生長因子(EGF)作化學(xué)誘導(dǎo)物，發(fā)現(xiàn)其趨化性遷移能力減少了44%-54%；然而，當(dāng) transwell上、下都加入相同濃度 EGF激活細(xì)胞移動(dòng)并且排除趨化性影響時(shí)，只有對(duì)照組細(xì)胞遷移能力下降，這表明低表達(dá)KI F11未破壞細(xì)胞遷移，卻嚴(yán)重破壞其趨化性。
　　因此我們認(rèn)為，細(xì)胞缺乏有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白KIF11時(shí)，無法對(duì)EGF介導(dǎo)的趨化反應(yīng)做出相應(yīng)反應(yīng)。接著，通過MDA-MB-231和小

4、鼠胚胎成纖維母細(xì)胞NIH3T3中KIF11免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，當(dāng)加入EGF作用15分鐘后，用抗磷酸酪氨酸和EGFR抗體檢測到與EGF受體(EGFR)蛋白類似的180kD條帶；相對(duì)應(yīng)地，EGFR免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)也檢測到KIF11被沉淀下來，表明兩組細(xì)胞系中存在 KIF11/EGFR復(fù)合物，但并不受 EGF影響。然而在MDA-MB-231細(xì)胞系中，KIF11/EGFR免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示加入EGF會(huì)使該復(fù)合物在內(nèi)化的EGF受體形成的囊泡結(jié)構(gòu)中，臨