慢病毒介導(dǎo)的CDNF對大鼠坐骨神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的作用研究.pdf

1、目的:
　　周圍神經(jīng)損傷是臨床常見病，常常導(dǎo)致嚴重的神經(jīng)支配區(qū)域功能損害。本實驗應(yīng)用過表達的CDNF在大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型中，探討聯(lián)合應(yīng)用人工神經(jīng)導(dǎo)管和CDNF基因治療對周圍神經(jīng)再生的作用。
　　方法:
　　在本研究中，我們將神經(jīng)導(dǎo)管的導(dǎo)向作用與重組CDNF慢病毒載體聯(lián)合起來治療坐骨神經(jīng)損傷。首先，構(gòu)建表達重組CDNF慢病毒載體，應(yīng)用大鼠神經(jīng)坐骨神經(jīng)缺損模型，觀察神經(jīng)導(dǎo)管和CDNF對坐骨神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的影響。

2、>　　(1)術(shù)后2、4、6、8周時間點，檢測大鼠足跡并計算坐骨神經(jīng)功能指數(shù)。
　　(2)術(shù)后4周，取坐骨神經(jīng)再生段遠端1cm的坐骨神經(jīng)，液氮保存后Westernblot檢測各組CDNF蛋白的表達水平。
　　(3)在術(shù)后4、8周時間點，取大鼠再生坐骨神經(jīng)和正常神經(jīng)做HE染色，觀察神經(jīng)組織學(xué)大致形態(tài)。應(yīng)用免疫組化技術(shù)染色S100蛋白以顯示髓鞘，染色NF200蛋白以顯示軸突。
　　(4)在術(shù)后8周時間點，掃描電鏡觀察再生的神

3、經(jīng)，對再生髓鞘的厚度進行測量分析。
　　(5)在術(shù)后4、8周，取手術(shù)側(cè)腓腸肌稱重分析，評估坐骨神經(jīng)恢復(fù)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)在術(shù)后4周時間點，重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組損傷神經(jīng)遠端高表達CDNF蛋白。
　　(2)在術(shù)后4周和8周時間點，HE常規(guī)染色與S100和NF200免疫組化顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組再生的神經(jīng)在形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)出更規(guī)則有序的形態(tài)和良好的軸突再生。
　　(3)透射電鏡下重組CD

4、NF慢病毒載體應(yīng)用組在8周時神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)與正常神經(jīng)更為類似，再生髓鞘厚度顯著優(yōu)于對照組。
　　(4)腓腸肌濕重測量顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組明顯減輕肌肉萎縮。大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)分析結(jié)果顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組，大鼠后肢功能恢復(fù)明顯優(yōu)于對照組。
　　結(jié)論:
　　實驗證實CDNF慢病毒載體的基因治療在神經(jīng)損傷段提供一個穩(wěn)定持續(xù)的CDNF表達，再生的坐骨神經(jīng)在形態(tài)學(xué)和功能學(xué)上表現(xiàn)出良好的修復(fù)，明顯促進坐骨神