人剪切修復(fù)基因XPD抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖遷移及對自噬水平調(diào)控的實驗研究.pdf

1、I分類號：密級：UDC：學(xué)號：416522612021南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文人剪切修復(fù)基因XPD抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖遷移及對人剪切修復(fù)基因XPD抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖遷移及對自噬水平調(diào)控的實驗研究自噬水平調(diào)控的實驗研究ResearchofXPDgenesuppressproliferationmigrationinhumanhepatocellurcarcinomaHepG2cellaswellasdysregulat

2、eautophagyinvitro李琳琳李琳琳培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：張吉翔教授主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)（消化）論文答辯日期：2015年5月答辯委員會主席：何明評閱人：陳建勇劉丹2015年5月摘要II摘要摘要目的：目的：探究上調(diào)肝癌細(xì)胞株HepG2中XPD基因的表達(dá)后對腫瘤細(xì)胞增殖凋亡、遷移以及自噬水平變化的影響。方法：方法：采用脂質(zhì)體作為載體介質(zhì)將重組質(zhì)粒pEGFPN2X

3、PD和空載質(zhì)粒pEGFPN2瞬時轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞內(nèi)，實驗分為四組1）空白對照組、2）脂質(zhì)體組、3）pEGFPN2組、4）pEGFPN2XPD組，使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)情況；MTT法觀察腫瘤細(xì)胞的增殖能力；流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞凋亡情況；體外平板克隆形成實驗觀察腫瘤細(xì)胞體外克隆集落形成情況；劃痕愈合實驗及Transwell實驗檢測腫瘤細(xì)胞遷移能力的變化。Westernblotting檢測HepG2細(xì)胞XPD及自噬相

4、關(guān)蛋白LC3、P62表達(dá)量的變化。結(jié)果：結(jié)果：熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒pEGFP－N2和重組質(zhì)粒pEGFP－N2XPD的細(xì)胞可見綠色熒光，轉(zhuǎn)染有效。上調(diào)XPD的表達(dá)后，結(jié)果顯示與對照組比較，實驗組細(xì)胞增殖能力減弱(p0.01)，細(xì)胞凋亡率增加(p0.01)，體外克隆形成數(shù)量減少(p0.01)，遷移能力減弱(p0.05)，并且上調(diào)LC3蛋白表達(dá)(p0.01)，而隨之P62的表達(dá)水平減少(p0.01)。結(jié)論：結(jié)論：過表達(dá)XPD基因能顯著抑