利用血清多肽圖篩選卵巢癌血清標(biāo)記物.pdf

1、研究背景：
　　 卵巢癌在婦科惡性腫瘤中發(fā)病率不是最高，但其死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位，在婦女因惡性腫瘤死亡中居第四位。卵巢癌好發(fā)于絕經(jīng)后女性，早期無癥狀，70％以上的卵巢癌確診時(shí)已屬晚期。近幾十年來，卵巢癌手術(shù)治療和化學(xué)治療取得了很大進(jìn)展，但晚期卵巢癌五年生存率仍維持在30％左右。早期卵巢癌(FIGOI期)五年生存率可達(dá)90％。因此，尋找有效的早期診斷手段，提高I期卵巢癌的診斷率是改善卵巢癌整體預(yù)后、降低治療成本、提高生活質(zhì)量的

2、根本途徑。而卵巢癌生物標(biāo)記物是卵巢癌早期診斷的重要手段之一。
　　 卵巢癌腫瘤標(biāo)記物中最常用的是CA125，它是體腔上皮正常表達(dá)的一種抗原蛋白，晚期卵巢癌中，超過90％病例CA125升高，而在I期卵巢癌中，大約有50％病例CA125正常，因此血清CA125敏感性和特異性不能滿足篩查指標(biāo)的要求。卵巢癌人群發(fā)病率相對(duì)較低，僅為40/10，0000，目前臨床應(yīng)用的腫瘤標(biāo)記物均不能達(dá)到陽性預(yù)測(cè)值10％的普查要求。需要敏感性和特異性更高的

3、標(biāo)記物用于卵巢癌篩查。
　　 生物質(zhì)譜技術(shù)是發(fā)現(xiàn)和鑒定蛋白質(zhì)有力工具，基于MALDI-TOF MS技術(shù)的Clinprot系統(tǒng)是一種新的液體蛋白質(zhì)芯片技術(shù)，使用磁珠純化和富集目標(biāo)蛋白，是一種高通量，高度靈敏的蛋白質(zhì)分析手段，可以用于腫瘤標(biāo)記物的篩選研究。
　　 目的：利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)技術(shù)分析血清多肽圖，建立卵巢癌血清診斷模型，尋找可以用于卵巢癌早期診斷的標(biāo)記物。
　

4、　 方法：所有樣本均來自解放軍總醫(yī)院，包括卵巢癌患者血清70例，健康對(duì)照血清59例，以52例卵巢癌患者血清和44例健康對(duì)照血清為動(dòng)i練組，18例卵巢癌患者血清和15例健康對(duì)照血清為驗(yàn)證組。選擇國家生物醫(yī)學(xué)中心自制的銅螯合磁珠試劑盒分離血清樣本目標(biāo)蛋白質(zhì)/多肽，首先檢驗(yàn)了系統(tǒng)的重復(fù)性，建立了穩(wěn)定的Clinprot操作系統(tǒng)。之后，使用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)對(duì)磁珠試劑盒處理的訓(xùn)練組52例卵巢癌血清樣

5、本、44例健康血清樣本進(jìn)行質(zhì)譜分析，獲取質(zhì)譜數(shù)據(jù)，再利用ClinprotoolsTM2.1軟件對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，建立卵巢癌診斷模型；選取驗(yàn)證組18例卵巢癌血清和15例健康對(duì)照血清對(duì)產(chǎn)生的模型進(jìn)行分類驗(yàn)證和交叉驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：本研究的日間重復(fù)性、日內(nèi)重復(fù)性、反復(fù)凍融重復(fù)性峰強(qiáng)度的變異系數(shù)(CV)<27％，符合國際公認(rèn)的重復(fù)性要求；35-50歲健康女性不同年齡段的血肽圖沒有顯著差異；通過Clinprotools2.1軟件對(duì)這訓(xùn)

6、練組血清樣品進(jìn)行對(duì)比分析，在m/z1000-10000的范圍內(nèi)共得到25個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異多肽峰(P<0.0001)，表達(dá)上調(diào)的多肽有12個(gè)，下調(diào)的有13個(gè)；以這些峰建立的診斷模型在該訓(xùn)練集中的特異性達(dá)到96.67％，敏感性達(dá)到100％。分類驗(yàn)證中該模型正確識(shí)別了全部18例卵巢癌病例和15例健康對(duì)照中的14例；交叉驗(yàn)證顯示該模型的敏感性100％，特異性93.3％。
　　 結(jié)論：
　　 Clinprot系統(tǒng)以磁珠分離技術(shù)