糖尿病腎病血清標(biāo)記物的篩選及發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為以下三部分： 一、蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選早期糖尿病腎病血清標(biāo)記物 目的：運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選早期糖尿病腎病患者血清標(biāo)記物，探討其與糖尿病腎病發(fā)病的關(guān)系。 方法：采用凝膠分級(jí)與質(zhì)譜聯(lián)用的方法對(duì)5例男性健康對(duì)照混合血清和5例男性2型糖尿病患者混合血清進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組分析。在蛋白質(zhì)組質(zhì)譜分析出差異蛋白的基礎(chǔ)上收集96例上海地區(qū)中國人血清、2型糖尿病微量白蛋白尿組(MicroalbuminuriaMA)(n=24

2、)和臨床蛋白尿組(ClinicalproteinuriaCP)(n=24))，用Westernblot方法驗(yàn)證血清差異蛋白表達(dá)量并進(jìn)行比較；同時(shí)常規(guī)檢測(cè)血糖、糖化血紅蛋白(HbAlc)、血脂譜、高敏C反應(yīng)蛋白、腎功能及尿微量白蛋白排泄率(AER)，根據(jù)腎臟病膳食改良試驗(yàn)(ModificationofDietinRenalDisease，MDRD)公式計(jì)算腎小球?yàn)V過率(estimatedglomerularfiltrationrate，e

3、GER)。 結(jié)果：1.蛋白質(zhì)組分析結(jié)果：1)健康對(duì)照組共鑒定到3,010種蛋白，糖尿病患者組共鑒定到3,224種蛋白。2)兩組間血清蛋白質(zhì)差異主要位于低豐度蛋白區(qū)，健康對(duì)照組有13種蛋白表達(dá)上調(diào)；糖尿病患者組有29種蛋白表達(dá)上調(diào)。其中，纖維膠凝蛋白(ficolin3)在糖尿病患者組顯著上調(diào)。3)通路預(yù)測(cè)和定量偏好性分析見到，血清補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)系統(tǒng)中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平在糖尿病患者血清中表現(xiàn)出顯著上調(diào)的定量偏好性。2.差異蛋白fico

4、lin3驗(yàn)證結(jié)果：1)：NA組血清ficolin3水平顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.05)；MA組患者血清ficolin3水平(2.13±1.34)顯著高于健康對(duì)照組(0.89±0.43)(P＜0.01)和NA組(1.42±0.88)(P＜0.01)。2)早期糖尿病腎病患者血清ficolin3水平與HbAlc、LDL-c、AER獨(dú)立相關(guān)(R=0.263、0.321、和0.245，P＜0.01)。Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)ficolin3

5、是早期糖尿病腎病的獨(dú)立相關(guān)變量(比數(shù)比=2.37，P＜0.05)。3)臨床蛋白尿組患者血清ficolin3水平(1.05±0.71)與健康對(duì)照組及NA組比較無顯著性差異，但是顯著降低于MA組(2.13±1.34)(P＜0.01)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果表明該組患者血清ficolin3水平與eGFR顯著正相關(guān)(R=0.446，P=0.029)；與血糖、血脂、AER和hs-CRP無顯著相關(guān)(P＞0.05)。4)在NA組或MA組內(nèi)有視網(wǎng)膜

6、病變患者與無糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的血清ficolin3水平之間無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論：1.糖尿病患者血清中有29種蛋白表達(dá)上調(diào)，健康對(duì)照中有13種蛋白表達(dá)上調(diào)；糖尿病患者血液中存在補(bǔ)體系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)級(jí)聯(lián)激活。2.Ficolin3可能是早期糖尿病腎病的血清標(biāo)記物，而且與糖尿病腎病晚期病變程度有關(guān)。3.蛋白質(zhì)組方法是疾病生物標(biāo)記物篩選的有效手段。介紹了蛋白質(zhì)組分析結(jié)果和差異蛋白ficolin3驗(yàn)證結(jié)果。 二、糖

7、尿病腎病患者血清色素上皮源因子的變化及意義 目的：色素上皮源因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)與糖尿病大鼠腎病發(fā)病密切相關(guān)。目前尚未見到血清PEDF水平與糖尿病腎病關(guān)系研究的報(bào)導(dǎo)，它在人體內(nèi)的病理生理意義仍需進(jìn)一步研究。過臨床研究探討血清PEDF水平在糖尿病腎病患者中的變化；血清PEDF與糖尿病腎病的關(guān)系。 方法：收集46例健康對(duì)照、166例不同程度糖尿病腎病(糖尿病正常蛋白

8、尿(NA)組n=59例、微量白蛋白尿(MA)組n=68例、臨床蛋白尿(CP)組n=39例)患者血清，用ELISA方法檢測(cè)其血清PEDF水平。檢測(cè)HbAlc、血脂譜、高敏C反應(yīng)蛋白(highsensitiveCreactiveprotein，hs-CRP)、腎功能及24h尿微量白蛋白排泄率(albuminuriaexcretionrate，AER)，根據(jù)腎臟病膳食改良試驗(yàn)(ModificationofDietinRenalDisease，

9、MDRD)公式計(jì)算腎小球?yàn)V過率(estimatedglomerularfiltrationrate，eGER)。 結(jié)果：1.糖尿病腎病微蛋白尿和臨床蛋白尿患者血清PEDF水平顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.01)和NA組(P＜0.05)，并隨著腎臟病變階段的進(jìn)展而逐漸升高。2.Pearson相關(guān)分析表明:血清PEDF水平與年齡、收縮壓、舒張壓)、體重指數(shù))、甘油三脂、高密度脂蛋白-膽固醇顯著相關(guān)。3.以eGFR90ml·min-1·

10、1.73m2作為分界限，將各組患者分為GFR正常和GFR異常組兩個(gè)亞組，比較后發(fā)現(xiàn):各組內(nèi)GFR正常和GFR減低亞組間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論：1.糖尿病腎病患者血清PEDF水平代償性升高；2.血清PEDF水平與糖尿病腎病發(fā)病有關(guān)。 三、血管緊張素Ⅱ1受體拮抗劑對(duì)2型糖尿病腎病患者血清和尿液VEGF水平的影響 目的：動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)腎素血管緊張素系統(tǒng)抑制治療可有效降低糖尿病腎組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(v

11、ascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的表達(dá)，緩解其組織損傷。故推測(cè)ARB類藥物有降低糖尿病患者VEGF水平的作用。通過ARB類藥物厄貝沙坦的干預(yù)治療，觀察糖尿病腎病患者血清和尿液VEGF的改變及ARB對(duì)糖尿病腎病患者血清和尿液VEGF水平的影響，探討ARB對(duì)DN保護(hù)性作用機(jī)制。 方法：對(duì)46例健康對(duì)照、166例不同程度糖尿病腎病(糖尿病正常蛋白尿(NA)組n=59例、微量白蛋白尿(MA)組n=

12、68例、臨床蛋白尿(CP)組n=39例)以及實(shí)施6個(gè)月厄貝沙坦治療的18例高血壓糖尿病合并微量白蛋白尿患者血清及尿液，用ELISA方法檢測(cè)其VEGF水平。 結(jié)果：1.糖尿病正常蛋白尿組血清VEGF水平顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.05)，MA組、DN組和健康對(duì)照組之間比較，血清VEGF水平均無顯著性差異(P＞0.05)。Pearson相關(guān)分析表明血清VEGF水平僅與BMI(R=0.194，P＜0.01)、HbAlc(R=0.124

13、，P＜0.05)顯著相關(guān)；與AER、eGFR無顯著相關(guān)。2.尿VEGF水平在糖尿病患者顯著增加并隨著腎病階段的進(jìn)展而逐漸升高。血清VEGF水平在治療前后在緩解組和未緩解組均未見有顯著差異。相關(guān)分析表明，尿液VEGF水平的變化值與尿微量白蛋白的變化值在調(diào)整了血壓改變之后仍顯著相關(guān)(R=0.57，P＜0.01)。 結(jié)論：1.蛋白質(zhì)組方法是疾病生物標(biāo)記物篩選的有效手段。2.糖尿病患者血清中有29種蛋白表達(dá)上調(diào)，健康對(duì)照中有13種蛋白表