系統(tǒng)性硬皮病CD40L基因逃避X染色體失活的機(jī)制及作用研究.pdf

1、目的:系統(tǒng)性硬皮病(systemic sclerosis，SSc)是一種自身免疫性結(jié)締組織疾病，以自身抗體產(chǎn)生、皮膚及多系統(tǒng)器官進(jìn)行性纖維化、微血管病變?yōu)橹饕卣鳎l(fā)病率具有明顯性別差異，80％以上患者為女性，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)CD40配體(CD40L)在SSc病人和硬皮病模型小鼠中過度表達(dá)，但CD40L在SSc中表達(dá)增高的機(jī)制尚不清楚。我課題組之前研究發(fā)現(xiàn)DNA甲基化抑制劑可激活正常女性原失活的X染色體，導(dǎo)致CD4

2、0L過度表達(dá)。因此，本課題通過比較男女SSc患者CD40L表達(dá)水平和其調(diào)控序列DNA甲基化狀態(tài)，試圖探討SSc患者CD40L增高的原因，為該病發(fā)病機(jī)制的研究提供新的思路。
　　 方法:密度梯度離心法分離26例SSc患者（女16例，男10例）和25例健康對(duì)照者（女15例，男10例）的外周血單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞中CD40L的表達(dá)水平;磁珠分選CD4+T細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time RT-PCR）

3、檢測(cè)CD40L的mRNA表達(dá)水平;亞硫酸氫鈉測(cè)序檢測(cè)CD4+T細(xì)胞中CD40L基因調(diào)節(jié)序列的甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)果:與女性正常對(duì)照組相比，女性SSc患者CD4+T細(xì)胞中CD40LmRNA的表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05)，CD40L的蛋白表達(dá)水平亦顯著升高(P＜0.05);亞硫酸氫鈉測(cè)序結(jié)果顯示正常女性CD40L基因調(diào)控序列一半呈甲基化，一半呈去甲基化，而正常男性CD40L相同序列大部分呈去甲基化，女性SSc患者CD40L基因

4、啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū)域平均甲基化水平均顯著低于女性正常對(duì)照(P＜0.001; P＜0.001)，并且女性SSc患者CD40L啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū)域平均甲基化水平與其CD40LmRNA表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.629，P＜0.01;r=-0.727， p＜0.01);男性SSc患者組與男性正常對(duì)照組CD40L mRNA和蛋白表達(dá)水平均無顯著差異(P＞0.05; P＞0.05)，并且兩組CD40L基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū)域甲基化程度均較低，其平均