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文檔簡介
1、目的:
1.檢測膽道閉鎖患者全血及肝臟組織中MDSCs的表達情況,探尋MDSCs與膽道閉鎖之間的關系。
2.探索MDSCs的含量同11種細胞因子含量的關系,初步探討MDSCs在膽道閉鎖發(fā)生發(fā)展中的作用。
方法:
1.病例標本
全血標本:膽道閉鎖組(BA組,n=27),其對照組分別選取非肝膽系統(tǒng)疾病組(先天性肥厚性幽門狹窄,n=2;新生兒肺炎,n=5)、先天性膽管擴張癥組(CBD組,n=2
2、7)和新生兒肝炎組(NH組,n=13)。
血清標本:以上各組全血標本部分同時留取血清標本,膽道閉鎖組(BA組, n=18),膽總管擴張癥組(CBD,n=13),新生兒肝炎組(NH組,n=8)。
石蠟標本:膽道閉鎖組(BA組,n=1),新生兒肝炎組(NH組,n=5)。冰凍標本:擁有-80度冰箱凍存肝臟標本,膽道閉鎖組(BA組,n=26)先天性膽管擴張癥組(CBD組, n=12)。
2.全血標本中MDSCs含量
3、檢測
應用流式細胞技術檢測 BA組、非肝膽系統(tǒng)疾病組、CBD組和NH組中MDSCs的含量。檢測BA組肝臟組織病理分期早期、中晚期MDSCs的含量。檢測同一膽道閉鎖患者、新生兒肝炎患者隨年齡增長MDSCs的含量變化情況。
3.肝臟組織病理染色及MDSCs細胞免疫組織化學染色
將甲醛固定的肝臟標本制成石蠟切片后,進行病理染色和免疫組化檢測。病理染色采用HE染色、MASSON染色;病理分級方法根據阿克曼外科病理學
4、(第八版)膽道阻塞疾病組織學分級標準進行分級。免疫組織化學染色方法分別采用普通染色和雙重染色(CD33+HLA-DR-)方法對肝臟組織中的MDSCs細胞染色。
4.膽道閉鎖血清及肝臟組織中11種細胞因子含量檢測
應用流式微球技術檢測膽道閉鎖血清及肝臟組織中11種細胞因子含量,分析MDSCs含量同細胞因子之間的關系。
5.統(tǒng)計
用SPSS.19軟件對各組全血標本中MDSCs含量進行分析。對各組血清標
5、本及肝臟組織中11種細胞因子IL-12p70、IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α、TNF-β的含量進行比較分析。
結果:
1.全血標本中MDSCs的表達情況
應用流式細胞儀檢測全血標本中MDSCs(CD33+CD11b+HLA-DR-)表達情況,其中BA組 MDSCs平均含量為9.1%±1.1%,對照組中非肝膽系統(tǒng)疾病組MDSC平均含量為2.3%
6、±0.5%,CBD組MDSCs平均含量為3.5%±0.6%,NH組MDSCs平均含量為11.3%±1.9%,BA組MDSCs含量明顯高于非肝膽系統(tǒng)疾病組和CBD組,差異存在統(tǒng)計學意義,BA組和NH組比較,差異無統(tǒng)計學意義。
BA組根據肝臟組織病理分型分為早期與中晚期組,在早期組中,MDSCs平均含量為6.0%±1.2%,而在中晚期組中,MDSCs平均含量為12.1±2.2%,兩組的差異有統(tǒng)計學意義。
同時還檢測了同一
7、病人不同時期 MDSCs表達,發(fā)現在 BA組中同一病人MDSC含量隨年齡增長逐漸升高,然而,在NH組中同一病人MDSCs含量卻隨年齡增加而呈下降的趨勢。
2.膽道閉鎖肝臟組織病理變化及MDSCs在肝臟組織中的表達情況
膽道閉鎖肝臟組織可見肝小葉內有不同程度的肝細胞羽毛狀變性、膽酸鹽淤積,部分可見肝細胞壞死和嗜酸性小體出現,嚴重者可見假小葉形成。匯管區(qū)膽小管增生、膽道上皮細胞變性。以膽小管為中心,淋巴細胞和粒細胞浸潤生
8、長,不同程度的纖維束包裹膽小管。根據阿克曼外科病理學(第八版)膽道阻塞疾病組織學分級標準對膽道閉鎖患者進行病理分級,其中早期9例,中晚期10例。免疫組化染色后,BA組肝臟組織匯管區(qū)可見到MDSCs細胞。NH組肝臟組織匯管區(qū)未見到MDSCs細胞。
3.血清及肝臟組織中11種細胞因子的含量
血清標本:BA組中細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TNF-α含量明顯高于CBD組同種細胞因子含量,差異具有統(tǒng)計學意義。BA
9、組中細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-β含量明顯高于NH組同種細胞因子含量,差異具有統(tǒng)計學意義。
肝臟組織:BA組細胞因子IFN-γ較CBD組減少,差異無統(tǒng)計學意義。而細胞因子IL-4較CBD組增多,差異無統(tǒng)計學意義。兩種細胞因子的比值(IFN-γ/IL-4)則是BA組明顯低于CBD組,差異存在統(tǒng)計學意義。
4.外周血中MDSCs含量同11種細胞因子含量相關性
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