血小板對RA滑膜炎癥和增生的影響及蛭元方干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過觀察血小板對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）大鼠滑膜炎癥和增生的影響，來探討蛭元方對活化血小板加劇RA大鼠滑膜炎癥和增生的作用并研究其可能作用機(jī)制，為本方臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、將常規(guī)培養(yǎng)的大鼠RSC364細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（N）和RA模型組（RA，0.5、1、2、5μg/LTNF-α）。先以激光共聚焦顯微鏡觀測常規(guī)培養(yǎng)的RSC364細(xì)胞，并于400倍鏡下拍照；再運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（EL

2、ISA）法和噻唑藍(lán)（MTT）法分別檢測各實驗組RSC364細(xì)胞培養(yǎng)上清中白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）的生成量及其增殖情況。
　　2、采用密度梯度離心的方法制備血小板，并以5μg牛II型膠原蛋白分別誘導(dǎo)其活化1h、5h和10h，運(yùn)用ELISA法檢測各實驗組血小板上清中sP-選擇素的表達(dá)情況；將常規(guī)培養(yǎng)的大鼠RSC364細(xì)胞隨機(jī)分為：正常組（N）、RA模型組（RA）、非血小板活化組（NP）、活化血小板干預(yù)組（AP），

3、參照分組情況，依次加入不同濃度TNF-α、未活化血小板及活化血小板，運(yùn)用ELISA法和MTT法分別檢測各組RSC364細(xì)胞上清中IL-6及IL-8的生成量及其增殖情況。
　　3、將常規(guī)培養(yǎng)的大鼠RSC364細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（N）、RA模型組（RA）、活化血小板干預(yù)組（AP）、蛭元方干預(yù)組（ZG），參照分組情況，依次加入不同濃度TNF-α、活化血小板、10%蛭元方含藥血清，運(yùn)用ELISA法分別檢測RSC364細(xì)胞上清中IL-6、I

4、L-8的生成量及血小板上清中sP-選擇素的表達(dá)情況，采用MTT法觀察RSC364細(xì)胞的增殖情況。
　　結(jié)果：
　　1、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：常規(guī)培養(yǎng)的大鼠RSC364細(xì)胞呈長梭形，胞漿豐富，細(xì)胞外端有偽足伸出，排列較為不規(guī)則，符合成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點；在0.5、1、2μg/LTNF-α存在下，RA模型組RSC364細(xì)胞上清中IL-6和IL-8的生成量均明顯增加，并呈現(xiàn)劑量依賴性，與同一濃度的正常對照組相比，均具有顯著性差異（P<

5、0.05）；在5μg/LTNF-α存在下，RSC364細(xì)胞增殖率是10.93%，明顯高于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、牛II型膠原蛋白活化血小板5h時，血小板上清中sP-選擇素含量為142.30pg/mL，與1h和10h相比，5h時血小板s上清中P-選擇素的含量最高，差異顯著（P<0.05）；與RA模型組相比，活化血小板干預(yù)組RSC364細(xì)胞生成IL-6和IL-8的量均明顯增加（P<0.05和P<0.0

6、1），滑膜細(xì)胞增殖率為25.51%，亦明顯升高（P<0.05）。
　　3、與血小板干預(yù)組相比，蛭元方干預(yù)組RSC364細(xì)胞的IL-6和IL-8生成量均顯著降低（P<0.05和P<0.01），其增殖率為11.90%，亦有明顯下降（P<0.05），血小板sP-選擇素的表達(dá)量為42.80pg/mL，也顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、采用腫瘤壞死因子-α（TNF-α）干預(yù)RSC364細(xì)胞的方法，可實現(xiàn)體外建立R