滅活肺炎鏈球菌對人單核細胞MMP-12表達的上調(diào)作用.pdf

1、肺炎鏈球菌寄生于人的鼻咽部，是人類主要的致病菌之一，可導致肺炎、菌血癥、中耳炎及腦膜炎等多種疾病，至今在兒童中仍有很高的死亡率，每年5歲以下兒童死亡病例中有10﹪是由肺炎鏈球菌感染所致。近年來，肺炎鏈球菌耐藥菌株的不斷增加，使得對肺炎鏈球菌感染的治療越來越困難，人體自身免疫系統(tǒng)在抵抗感染中的作用又逐漸地受到重視。 感染肺炎鏈球菌后，機體多種免疫機制參與清除致病菌的反應，其中肺巨噬細胞作用獨特，它不僅直接吞噬細菌、分泌細胞因子、產(chǎn)

2、生抗體，還可以清除其他壞死的炎癥細胞，比如壞死的中性粒細胞等。動物實驗表明，當巨噬細胞缺失時，感染肺炎鏈球菌后，炎癥反應更加劇烈，死亡率也更高。 肺巨噬細胞由外周血中的單核細胞進入肺組織后分化而來。肺炎鏈球菌感染可以縮短骨髓中未成熟單核細胞進入循環(huán)系統(tǒng)的時間，肺炎鏈球菌感染后，外周血中單核細胞的數(shù)目增加；此外，研究表明，肺炎鏈球菌感染后，肺組織中的巨噬細胞數(shù)目也增加，可見肺炎鏈球菌感染可以引起外周血單核細胞向肺組織中的募集。

3、 在從循環(huán)系統(tǒng)遷移到肺組織的過程中，外周血單核細胞需要穿過血管基底膜、肺組織，而血管基底膜及肺組織中含有大量的細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)，比如膠原、彈性蛋白等，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)在單核細胞的遷移過程中發(fā)揮了重要的作用。 基質(zhì)金屬蛋白酶是一類鋅離子依賴的肽鏈內(nèi)切酶，降解多種細胞外基質(zhì)。迄今為止，至少發(fā)現(xiàn)了28種基質(zhì)金屬蛋白酶，它們在組織

4、重構、腫瘤轉(zhuǎn)移及細胞遷移中起主要作用。 單核細胞能分泌MMP-1,-2,-3,-7,-9,-14，-17,-25等多種基質(zhì)金屬蛋白酶，與B細胞、T細胞等其他炎癥細胞相比，單核細胞合成的MMP種類更多，因此單核細胞比其他炎癥細胞有更強的遷移能力。當用基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的活性后，炎癥細胞遷移的能力也受到極大的抑制，它們雖然可以穿過血管的內(nèi)皮層，卻會被阻止在血管的基底膜層，無法正常遷移到炎癥部位。 MMP-

5、12又稱彈性蛋白酶，其主要作用底物是彈性蛋白，而彈性蛋白又富集于肺臟，因此，MMP-12在肺部疾病中扮演重要角色，參與肺部組織重構、細胞遷移等多種病理生理過程。 本實驗通過用滅活肺炎鏈球菌與外周血單核細胞共培養(yǎng)的方法，利用免疫組化(Immunohistochemistry)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白免疫印跡技術(Westernblot)等觀察肺炎鏈球菌對單核細胞MMP-12表達的影響。 實驗分為濃度組和時

6、間組，分別從不同細菌濃度和不同作用時間兩方面觀察肺炎鏈球菌對單核細胞MMP-12表達的影響作用。實驗結(jié)果表明，肺炎鏈球菌能明顯提高單核細胞MMP-12的表達，濃度組中以109CFU/ml(CFU：colonyformingunits)組作用最為明顯，MMP-12的表達比對照組高近三倍，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；時間組中以12小時組作用最為明顯，MMP-12的表達比對照組高近五倍，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。 本