文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)以及病原學(xué)研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)以及病原學(xué)研究姓名：萬(wàn)夕和申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陸承平20081201文蛤“菊花瘟”在江蘇地區(qū)的流行病學(xué)、病理學(xué)及病原學(xué)研究化，主要表現(xiàn)為：外套膜、鰓、消化管、足等上皮細(xì)胞腫漲、變性、破裂或脫落，結(jié)締組織增生、變性或溶解，血淋巴細(xì)胞增多，肌纖維結(jié)構(gòu)松散、斷裂，組織中嗜堿性細(xì)胞增多；鰓組織發(fā)生壞死崩解；消化盲囊腺泡廣泛受損，導(dǎo)管上皮及結(jié)締組織發(fā)生溶解對(duì)

2、照組文蛤無上述病變采用透射電鏡觀察了發(fā)病文蛤的超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞病理學(xué)變化。結(jié)果顯示：在病蛤的鰓、肝臟、消化管、外套膜等組織中有大量病毒樣粒子的存在，該粒子呈球形或橢球形，無囊膜，直徑在45～55nm，核心與核衣殼間無明顯界限，大量存在于細(xì)胞間質(zhì)及被破壞的細(xì)胞質(zhì)中，少數(shù)存在于細(xì)胞核中，同時(shí)可見病毒包涵體的存在被該病毒樣粒子感染的細(xì)胞具有明顯的病理變化，主要表現(xiàn)為：線粒體峭消失，固縮或溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫漲并空泡化，溶酶體數(shù)量增多，嚴(yán)重的多數(shù)細(xì)胞器

3、消失，細(xì)胞溶解上述結(jié)果提示，文蛤“菊花瘟”的發(fā)生可能與該病毒樣粒子有關(guān)采用差速離心、酒石酸鉀墊超速離心與氯化銫密度梯度離心等方法純化文蛤“菊花瘟”病毒，比較了蔗糖、酒石酸鉀甘油與氯化銫三種不同介質(zhì)密度梯度離心的方法研究表明，氯化銫密度梯度離心適合于該病毒粒子的分離提純。經(jīng)稱量法得到文蛤“菊花瘟”病毒粒子在氯化銫中的浮力密度為1554～15829／mL透射電鏡負(fù)染觀察純化的病毒粒子顯示病毒粒子呈球形，二十四面體對(duì)稱，無囊膜，直徑6075n

4、m，表面粗糙，有明顯的殼粒結(jié)構(gòu)。利用已報(bào)道的水生雙RNA病毒的引物PrBl：5’GccGAcATcGTCAAcTCcAc一3’，PrB2：5GACAGGATCATCTTGGCATA3’，采用RTPCR方法，以病毒RNA的cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)文蛤“菊花瘟”病毒進(jìn)行了鑒定結(jié)果擴(kuò)增出大小為524bp的目的條帶，與文獻(xiàn)所報(bào)道的水生雙IⅢA病毒相符通過差速離心與超微過濾相結(jié)合的方法，得到純化的文蛤組織病毒液，人工感染健康文蛤試驗(yàn)分六組進(jìn)行，